| 缩略词表 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-25页 |
| 1.1 溶菌酶的研究 | 第11-16页 |
| 1.1.1 溶菌酶的定义 | 第11-12页 |
| 1.1.2 溶菌酶的分类 | 第12页 |
| 1.1.3 溶菌酶的功能 | 第12-13页 |
| 1.1.4 溶菌酶的应用 | 第13-15页 |
| 1.1.4.1 溶菌酶在食品行业的应用 | 第13页 |
| 1.1.4.2 溶菌酶在饲料行业的应用 | 第13-14页 |
| 1.1.4.3 溶菌酶在医药行业的应用 | 第14页 |
| 1.1.4.4 溶菌酶在科学研究中的应用 | 第14页 |
| 1.1.4.5 溶菌酶在新领域的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.1.5 水生生物溶菌酶的研究现状 | 第15-16页 |
| 1.2 对虾的免疫系统研究 | 第16-18页 |
| 1.2.1 无脊椎动物免疫防御机制 | 第16-17页 |
| 1.2.2 对虾的免疫防御 | 第17-18页 |
| 1.3 重组蛋白表达系统的研究 | 第18-21页 |
| 1.3.1 原核表达系统 | 第18-19页 |
| 1.3.2 真核表达系统 | 第19-20页 |
| 1.3.3 无细胞表达系统 | 第20-21页 |
| 1.4 包涵体的纯化及复性研究 | 第21-22页 |
| 1.4.1 包涵体的分离纯化 | 第21-22页 |
| 1.4.2 包涵体的去折叠 | 第22页 |
| 1.4.3 去折叠包涵体的体外复性 | 第22页 |
| 1.5 本实验的目的意义和主要技术路线 | 第22-25页 |
| 1.5.1 目的意义 | 第22-23页 |
| 1.5.2 主要技术路线 | 第23-25页 |
| 1.5.2.1 对虾溶菌酶成熟肽基因克隆 | 第23-24页 |
| 1.5.2.2 重组对虾溶菌酶基因的原核表达 | 第24-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-45页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第25-29页 |
| 2.1.1 材料 | 第25页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第25-26页 |
| 2.1.3 特异引物 | 第26页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第26页 |
| 2.1.5 主要溶液和缓冲液 | 第26-28页 |
| 2.1.6 培养基 | 第28-29页 |
| 2.1.7 主要仪器 | 第29页 |
| 2.1.8 生物信息学分析的主要软件与数据库 | 第29页 |
| 2.2 方法与步骤 | 第29-45页 |
| 2.2.1 日本对虾溶菌酶的基因克隆与序列分析 | 第29-37页 |
| 2.2.1.1 保守区序列的克隆 | 第29-34页 |
| 2.2.1.2 成熟肽序列的克隆 | 第34-37页 |
| 2.2.2 中国明对虾溶菌酶成熟肽基因的人工合成 | 第37-38页 |
| 2.2.2.1 全基因人工合成 | 第37页 |
| 2.2.2.2 菌种的活化与纯化 | 第37页 |
| 2.2.2.3 重组子的酶切鉴定 | 第37-38页 |
| 2.2.3 对虾溶菌酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第38-42页 |
| 2.2.3.1 重组表达载体的构建 | 第38-40页 |
| 2.2.3.2 融合蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第40-41页 |
| 2.2.3.3 重组对虾溶菌酶包涵体的处理和纯化 | 第41-42页 |
| 2.2.4 重组对虾溶菌酶的含量和活性检测 | 第42-45页 |
| 2.2.4.1 Bradford法测定蛋白质含量 | 第42-43页 |
| 2.2.4.2 重组对虾溶菌酶活性检测 | 第43-45页 |
| 第三章 结果与分析 | 第45-62页 |
| 3.1 日本对虾溶菌酶基因的克隆与分析 | 第45-53页 |
| 3.1.1 日本对虾总血RNA的检测 | 第45-46页 |
| 3.1.2 日本对虾保守区序列的RT-PCR扩增与分析 | 第46-47页 |
| 3.1.2.1 RT-PCR扩增保守区 | 第46页 |
| 3.1.2.2 保守区基因的菌落PCR验证 | 第46-47页 |
| 3.1.2.3 日本对虾保守区基因的测序分析 | 第47页 |
| 3.1.3 日本对虾成熟肽MjLys的RT-PCR扩增与分析 | 第47-52页 |
| 3.1.3.1 MjLys的RT-PCR扩增 | 第47-49页 |
| 3.1.3.2 MjLys成熟肽基因的菌落PCR和酶切验证 | 第49-51页 |
| 3.1.3.3 MjLys成熟肽基因的序列测定和分析 | 第51-52页 |
| 3.1.4 MjLys重组表达载体的构建 | 第52-53页 |
| 3.2 中国明对虾溶菌酶基因的克隆和分析 | 第53-55页 |
| 3.2.1 中国明对虾成熟肽FcLys的全基因人工合成 | 第53-54页 |
| 3.2.2 FcLys表达载体的构建 | 第54-55页 |
| 3.3 重组对虾溶菌酶的表达分析 | 第55-59页 |
| 3.3.1 重组对虾溶菌酶的表达 | 第55-57页 |
| 3.3.2 重组对虾溶菌酶的纯化和复性 | 第57-59页 |
| 3.4 重组对虾溶菌酶的含量测定和生物活性检测 | 第59-62页 |
| 3.4.1 重组对虾溶菌酶的含量检测 | 第59-60页 |
| 3.4.2 重组对虾溶菌酶的生物活性检测 | 第60-62页 |
| 第四章 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 附录A | 第68-69页 |
| 附录B | 第69页 |
