| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 常用缩略词 | 第6-9页 |
| 1 前言 | 第9-15页 |
| 1.1 细菌的耐药机制 | 第9-10页 |
| 1.2 主动外排泵系统与多重耐药（MDR，Multi Drug Resistance） | 第10-11页 |
| 1.3 靶位基因突变及主动外排系统对氟喹诺酮类耐药的作用 | 第11-12页 |
| 1.4 外膜蛋白 | 第12-13页 |
| 1.5 基因敲除技术在外排泵机制研究中的应用 | 第13-15页 |
| 2 材料和方法 | 第15-32页 |
| 2.1 材料 | 第15-17页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第15页 |
| 2.1.2 药物、培养基及主要试剂 | 第15-16页 |
| 2.1.3 常用试剂的配制 | 第16页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第16-17页 |
| 2.2 大肠杆菌K12外排泵及调控基因缺失株的构建 | 第17-23页 |
| 2.2.1 菌株的复苏 | 第17页 |
| 2.2.2 大肠杆菌K12电转化感受态细胞的制备 | 第17-18页 |
| 2.2.3 质粒的提取 | 第18页 |
| 2.2.4 电转化 | 第18-19页 |
| 2.2.5 含质粒pKD46的大肠杆菌K12感受态细胞的制备 | 第19页 |
| 2.2.6 Kan或Chl抗性基因片段的制备 | 第19-22页 |
| 2.2.7 电转化 | 第22-23页 |
| 2.3 外排泵及调控基因缺失株功能的研究 | 第23-32页 |
| 2.3.1 原菌K12及基因缺失株生长特性的测定 | 第23页 |
| 2.3.2 二倍琼脂稀释法测定环丙沙星最小抑菌浓度（MICs） | 第23-25页 |
| 2.3.3 体外诱导及突变频率的测定 | 第25页 |
| 2.3.4 原菌、敲除菌及诱导菌靶位基因突变的检测 | 第25-27页 |
| 2.3.5 诱导突变株中外排泵相关基因表达水平检测 | 第27-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-46页 |
| 3.1 成功构建大肠杆菌K12外排泵及调控基因缺失株 | 第32-33页 |
| 3.2 原菌及敲除菌生长特性测定结果 | 第33页 |
| 3.3 原菌、敲除菌及诱导菌MIC测定及靶位基因突变检测结果 | 第33-37页 |
| 3.4 外排泵基因及相关基因表达水平检测结果 | 第37-46页 |
| 4 讨论 | 第46-50页 |
| 全文总结 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
