| 摘要 | 第12-13页 |
| 英文摘要 | 第13页 |
| 1 文献综述 | 第14-26页 |
| 1.1 血竭的基源植物 | 第14-15页 |
| 1.2 血竭的化学成分 | 第15页 |
| 1.3 血竭的药理作用 | 第15-18页 |
| 1.3.1 抗血栓作用 | 第15-16页 |
| 1.3.2 降血糖作用 | 第16页 |
| 1.3.3 降血脂作用 | 第16页 |
| 1.3.4 抗菌作用 | 第16页 |
| 1.3.5 止血作用 | 第16-17页 |
| 1.3.6 抗炎作用与镇痛作用 | 第17页 |
| 1.3.7 抗氧化作用 | 第17页 |
| 1.3.8 抗肿瘤作用 | 第17页 |
| 1.3.9 促进创面修复作用 | 第17-18页 |
| 1.4 血竭的形成机制 | 第18页 |
| 1.5 代谢途径 | 第18-24页 |
| 1.5.1 查尔酮异构酶基因概述 | 第19页 |
| 1.5.2 查尔酮异构酶基因的发现 | 第19-21页 |
| 1.5.3 查尔酮异构酶基因的结构特征 | 第21页 |
| 1.5.4 查尔酮异构酶基因的类型 | 第21-22页 |
| 1.5.5 查尔酮异构酶基因的调控 | 第22-24页 |
| 1.6 研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 1.7 技术路线 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-43页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第26页 |
| 2.1.2 试验试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.3 试验仪器 | 第27页 |
| 2.2 试验方法 | 第27-43页 |
| 2.2.1 海南龙血树查尔酮异构酶基因的克隆 | 第27-28页 |
| 2.2.1.1 海南龙血树总 RNA 的提取 | 第27页 |
| 2.2.1.2 海南龙血树总RNA的反转录 | 第27页 |
| 2.2.1.3 海南龙血树基因组DNA的提取 | 第27页 |
| 2.2.1.4 DcCHI的克隆 | 第27-28页 |
| 2.2.2 海南龙血树查尔酮异构酶基因的生物信息学分析 | 第28页 |
| 2.2.3 海南龙血树查尔酮异构酶组织特异性表达 | 第28-30页 |
| 2.2.3.1 材料及模板 | 第28-29页 |
| 2.2.3.2 荧光定量PCR引物设计 | 第29页 |
| 2.2.3.3 实时荧光定量PCR | 第29-30页 |
| 2.2.4 Me JA、6-BA处理对DcCHI基因表达的影响 | 第30页 |
| 2.2.4.1 材料处理 | 第30页 |
| 2.2.4.2 RNA提取及RNA反转录 | 第30页 |
| 2.2.4.3 荧光定量PCR检测DcCHI表达量的变化 | 第30页 |
| 2.2.5 无机盐诱导剂对DcCHI的表达影响 | 第30页 |
| 2.2.6 海南龙血树查尔酮异构酶原核表达 | 第30-33页 |
| 2.2.6.1 p ET28a-DcCHI原核表达载体构建与鉴定 | 第30-32页 |
| 2.2.6.2 IPTG诱导的原核表达 | 第32页 |
| 2.2.6.3 SDS-PAGE电泳 | 第32-33页 |
| 2.2.7 DcCHI融合蛋白的分离与纯化 | 第33页 |
| 2.2.7.1 DcCHI融合蛋白的分离 | 第33页 |
| 2.2.7.2 DcCHI融合蛋白的纯化 | 第33页 |
| 2.2.7.3 SDS-PAGE 电泳 | 第33页 |
| 2.2.8 体外酶活测定 | 第33-34页 |
| 2.2.9 海南龙血树DcCHI启动子的克隆 | 第34-37页 |
| 2.2.9.1 Genome Walking文库的建构 | 第34-35页 |
| 2.2.9.2 Genome Walking | 第35-36页 |
| 2.2.9.3 DcCHI启动子的克隆 | 第36-37页 |
| 2.2.10 海南龙血树DcCHI启动子功能元件分析 | 第37页 |
| 2.2.11 DcCHI启动子的瞬时表达 | 第37-39页 |
| 2.2.11.1 DcCHI启动子植物表达载体构建 | 第37-39页 |
| 2.2.11.2 材料处理 | 第39页 |
| 2.2.11.3 农杆菌转化烟草叶片 | 第39页 |
| 2.2.11.4 激素处理烟草叶片 | 第39页 |
| 2.2.11.5 双荧光素酶的测定 | 第39页 |
| 2.2.12 Dcb HLH与DcCHI启动子的相互作用 | 第39-43页 |
| 2.2.12.1 构建诱饵载体p His2.1-DcCHI | 第40-41页 |
| 2.2.12.2 酵母（Y187）感受态的制备 | 第41页 |
| 2.2.12.3 诱饵载体p His2.1-DcCHI 3-AT浓度的筛选 | 第41页 |
| 2.2.12.4 酵母单杂实验 | 第41-43页 |
| 3 结果 | 第43-58页 |
| 3.1 海南龙血树DcCHI的克隆 | 第43页 |
| 3.2 海南龙血树DcCHI的生物信息学分析 | 第43-47页 |
| 3.2.1 海南龙血树DcCHI蛋白质理化性质分析 | 第43-44页 |
| 3.2.2 DcCHI蛋白序列比对及进化分析 | 第44-47页 |
| 3.3 DcCHI组织表达分析 | 第47页 |
| 3.4 Me JA、6-BA处理对DcCHI表达的影响 | 第47页 |
| 3.5 无机盐诱导剂对DcCHI的表达影响 | 第47-48页 |
| 3.6 DcCHI原核表达分析 | 第48-50页 |
| 3.6.1 原核表达载体构建 | 第48-49页 |
| 3.6.2 SDS-PAGE检测DcCHI融合蛋白表达 | 第49页 |
| 3.6.3 DcCHI融合蛋白纯化 | 第49-50页 |
| 3.7 DcCHI体外酶活鉴定 | 第50页 |
| 3.8 海南龙血树Genome Walker文库的建立 | 第50-52页 |
| 3.8.1 海南龙血树DNA的提取 | 第50-51页 |
| 3.8.2 Genome Walker文库的构建 | 第51-52页 |
| 3.9 DcCHI启动子的克隆 | 第52-53页 |
| 3.10 DcCHI启动子的功能元件分析 | 第53-54页 |
| 3.11 激素处理下对启动子的活性影响 | 第54-55页 |
| 3.12 DcHLH5与DcCHI启动子的相互作用 | 第55-58页 |
| 3.12.1 酵母单杂载体的构建 | 第55-56页 |
| 3.12.2 3-AT浓度筛选 | 第56页 |
| 3.12.3 酵母单杂验证Dcb HLH与DcCHI启动子的互作关系 | 第56-58页 |
| 4 讨论 | 第58-61页 |
| 4.1 DcCHI的表达特性 | 第58页 |
| 4.2 DcCHI的分型与酶活性 | 第58-59页 |
| 4.3 Me JA和 6-BA对DcCHI表达调控 | 第59页 |
| 4.4 DcCHI启动子与Dcb HLH1、Dcb HLH5的互作关系 | 第59-61页 |
| 5 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 个人简介 | 第73页 |
