中文摘要 | 第1-7页 |
英文摘要 | 第7-10页 |
缩略词表 | 第10-11页 |
第一章 前言 | 第11-25页 |
1.H CMV 简介 | 第11页 |
2.H CMV 感染 | 第11-14页 |
·先天性感染 | 第12-13页 |
·免疫低下人群的感染 | 第13-14页 |
3.H CMV 基本特征 | 第14-17页 |
·病毒形态与结构 | 第14-15页 |
·病毒基因组结构 | 第15-17页 |
4. 病毒DNA 复制 | 第17-19页 |
5.H CMV 致病机制 | 第19-20页 |
6.H CMV UL/ b'区域研究现状 | 第20-21页 |
7.U L148 基因简介与研究现状 | 第21页 |
8.R ACE 技术原理简介 | 第21-24页 |
9. 课题研究的意义 | 第24-25页 |
第二章 技术路线 | 第25-26页 |
第三章 实验仪器与材料 | 第26-29页 |
1. 主要仪器 | 第26-27页 |
2. 实验材料 | 第27-29页 |
·主要试剂 | 第27-28页 |
·质粒、菌种和病毒株 | 第28页 |
·其他主要试剂配方 | 第28-29页 |
第四章 实验方法 | 第29-45页 |
1. 细胞培养 | 第29页 |
·细胞复苏 | 第29页 |
·细胞传代 | 第29页 |
2. 病毒培养与鉴定 | 第29-31页 |
·病毒培养 | 第29-30页 |
·病毒DNA 抽提 | 第30页 |
·病毒鉴定 | 第30-31页 |
3.H CMV 总RNA 的提取 | 第31-32页 |
4. 利用5’RACE 技术扩增UL148 基因5’末端全长 | 第32-39页 |
·去磷酸化处理 | 第32-33页 |
·“去帽子”反应 | 第33页 |
·5’RACE Adaptor 的连接 | 第33-34页 |
·反转录反应 | 第34-35页 |
·UL148 基因5’末端的扩增 | 第35-36页 |
·UL148 基因5’末端的克隆及序列分析 | 第36-39页 |
5. 利用3’RACE 技术扩增UL148 基因3’末端全长 | 第39-42页 |
·引物设计 | 第39页 |
·UL148 基因3’末端的扩增 | 第39-41页 |
·UL148 基因3’末端的克隆及序列分析 | 第41-42页 |
6.U L148 基因全长cDNA 序列的扩增、克隆和序列分析 | 第42-45页 |
·HCMV 总RNA 的纯化 | 第42页 |
·HCMV RNA 逆转录成cDNA | 第42-43页 |
·HCMV RNA 的鉴定 | 第43-44页 |
·UL148 基因的RT-PCR 扩增 | 第44-45页 |
·UL148 基因RT-PCR 产物的克隆及测序 | 第45页 |
第五章 实验结果及分析 | 第45-59页 |
1. 病毒的分离与培养 | 第45-46页 |
·HFF 细胞培养结果 | 第45页 |
·HCMV 感染HFF 细胞出现病变效应 | 第45-46页 |
2.H CMV 培养与鉴定 | 第46页 |
3.H CMV 总RNA 的提取结果 | 第46-47页 |
4. 利用5’-RACE 技术扩增UL148 基因5’末端 | 第47-49页 |
·巢式PCR 扩增UL148 基因的5’末端 | 第47页 |
·UL148 基因5’末端的克隆及测序结果 | 第47-49页 |
5. 利用3’RACE 技术扩增UL148 基因3’末端 | 第49-52页 |
·巢式PCR 扩增UL148 基因的3’末端 | 第49页 |
·UL148 基因3’末端的克隆及测序结果 | 第49-52页 |
6.U L148 基因全长的扩增、克隆和测序 | 第52-54页 |
·HCMV RNA 的鉴定结果 | 第52页 |
·UL148 基因的RT-PCR 扩增结果 | 第52-53页 |
·UL148 基因的RT-PCR 产物的克隆及测序结果 | 第53-54页 |
7.U L148 基因全长cDNA 生物信息学分析结果 | 第54-59页 |
·编码蛋白翻译后修饰位点分析结果 | 第54-55页 |
·HCMV UL148 基因编码蛋白性质分析 | 第55页 |
·UL148 基因编码蛋白质疏水性轮廓分析 | 第55-56页 |
·UL148 基因编码蛋白质二级结构及功能分析 | 第56-59页 |
第六章 讨论 | 第59-63页 |
1.H CMV 感染HFF 细胞后的鉴定 | 第59页 |
2. 本实验RACE 技术面临的困难及解决方法 | 第59-61页 |
3.R T-PCR 时基因组的污染 | 第61页 |
4.U L148、UL132 基因转录本cDNA 全长的判断 | 第61页 |
5.U L148、UL132 基因转录本cDNA 全长序列信息分析 | 第61-62页 |
6. 研究展望 | 第62-63页 |
第七章 全文工作总结 | 第63-64页 |
第八章 参考文献 | 第64-72页 |
第九章 其他 | 第72-80页 |
参考文献 | 第77-80页 |
附录 | 第80-89页 |
研究生期间发表的论文 | 第89-90页 |
致谢 | 第90-91页 |