| 中文摘要 | 第11-13页 |
| ABSTRACT | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-26页 |
| 1.1 Ran蛋白概述 | 第16-17页 |
| 1.1.1 Ran蛋白 | 第16页 |
| 1.1.2 Ran蛋白活性调控及其辅助调控因子 | 第16-17页 |
| 1.1.3 Ran信号通路基本功能 | 第17页 |
| 1.2 RCC1染色体浓缩调节因子 | 第17页 |
| 1.3 RCC1结构域 | 第17-18页 |
| 1.4 RCC1功能 | 第18-23页 |
| 1.4.1 RCC1参与调控核质运输 | 第18页 |
| 1.4.2 RCC1参与有丝分裂期纺锤体的组装 | 第18-19页 |
| 1.4.3 RCC1参与调控细胞周期和核膜重建 | 第19-20页 |
| 1.4.4 RCC1防止DNA多重复制 | 第20页 |
| 1.4.5 RCC1动态的与染色质结合 | 第20-21页 |
| 1.4.6 RCC1调节纺锤体组装检验点 | 第21-22页 |
| 1.4.7 RCC1调控核膜重建 | 第22-23页 |
| 1.5 嗜热四膜虫概述 | 第23-24页 |
| 1.6 本课题的研究意义 | 第24-26页 |
| 第二章 嗜热四膜虫中RCC1基因的生物信息学分析 | 第26-37页 |
| 2.1 材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第26页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.3 主要试剂配制 | 第27页 |
| 2.1.4 主要实验仪器 | 第27-28页 |
| 2.1.5 实验所用引物 | 第28页 |
| 2.2 方法 | 第28-32页 |
| 2.2.1 嗜热四膜虫细胞的培养和饥饿 | 第28页 |
| 2.2.2 嗜热四膜虫的交配 | 第28-29页 |
| 2.2.3 嗜热四膜虫RNA的提取 | 第29页 |
| 2.2.4 嗜热四膜虫cDNA的合成 | 第29-30页 |
| 2.2.5 嗜热四膜虫RCC1基因的实时荧光定量分析 | 第30页 |
| 2.2.6 嗜热四膜虫RCC1基因的克隆 | 第30-32页 |
| 2.2.7 RCC1蛋白序列聚类分析及表达特性 | 第32页 |
| 2.3 结果 | 第32-35页 |
| 2.3.1 RCC1基因序列的扩增 | 第32页 |
| 2.3.2 RCC1基因的表达谱分析 | 第32-33页 |
| 2.3.3 RCC1蛋白序列分析和聚类分析 | 第33-35页 |
| 2.4 讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 嗜热四膜虫中RCC1细胞定位分析 | 第37-52页 |
| 3.1 材料 | 第37-40页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第37页 |
| 3.1.2 试剂与工具酶 | 第37-38页 |
| 3.1.3 实验所需引物 | 第38页 |
| 3.1.4 主要实验仪器 | 第38-39页 |
| 3.1.5 主要试剂配制 | 第39-40页 |
| 3.2 方法 | 第40-48页 |
| 3.2.1 四膜虫细胞培养 | 第40页 |
| 3.2.2 pXS75-RCC1过表达载体的构建 | 第40-43页 |
| 3.2.3 嗜热四膜虫pNeo4-HA-RCC1重组载体的构建 | 第43-44页 |
| 3.2.4 嗜热四膜虫细胞基因枪转化 | 第44-46页 |
| 3.2.5 阳性克隆的筛选 | 第46页 |
| 3.2.6 嗜热四膜虫DNA的快速提取和PCR鉴定 | 第46-47页 |
| 3.2.7 免疫荧光定位分析 | 第47-48页 |
| 3.3 结果 | 第48-50页 |
| 3.3.1 内源性表达融合HA-RCC1载体的构建及重组鉴定 | 第48-49页 |
| 3.3.2 RCC1在四膜虫不同细胞周期中的定位模式 | 第49-50页 |
| 3.4 讨论 | 第50-52页 |
| 第四章 嗜热四膜虫中RCC1异常表达都导致异常细胞核分裂 | 第52-61页 |
| 4.1 材料 | 第52-53页 |
| 4.1.1 质粒和菌株 | 第52页 |
| 4.1.2 试剂与工具酶 | 第52页 |
| 4.1.3 实验所需引物 | 第52-53页 |
| 4.1.4 主要实验仪器 | 第53页 |
| 4.1.5 主要试剂配制 | 第53页 |
| 4.2 方法 | 第53-55页 |
| 4.2.1 嗜热四膜虫细胞的培养 | 第53页 |
| 4.2.2 嗜热四膜虫pXS75-RCC1过表达载体的构建 | 第53页 |
| 4.2.3 嗜热四膜虫pNeo4-RCC1敲除载体的构建 | 第53页 |
| 4.2.4 嗜热四膜虫细胞转化 | 第53-54页 |
| 4.2.5 阳性克隆的筛选 | 第54页 |
| 4.2.6 Real-time PCR | 第54页 |
| 4.2.7 DAPI染色细胞核 | 第54-55页 |
| 4.3 结果 | 第55-59页 |
| 4.3.1 pXS75-RCC1过表达载体的构建及重组鉴定 | 第55页 |
| 4.3.2 RCC1基因在不同浓度Cd~(2+)诱导下转录水平测定 | 第55-56页 |
| 4.3.3 过表达RCC1影响细胞核分裂 | 第56-57页 |
| 4.3.4 pNeo4-RCC1载体的构建及重组鉴定 | 第57-58页 |
| 4.3.5 敲减RCC1基因转录水平测定 | 第58-59页 |
| 4.3.6 RCC1敲减引起小核异常分裂 | 第59页 |
| 4.4 讨论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 总结与展望 | 第67-69页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 个人简况及联系方式 | 第71-72页 |
| 承诺书 | 第72-73页 |
