| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-46页 |
| 1.水产养殖业与细菌性病害 | 第13-14页 |
| 2.弧菌的致病性 | 第14-20页 |
| ·鳗弧菌 | 第15页 |
| ·创伤弧菌 | 第15-16页 |
| ·溶藻弧菌 | 第16-17页 |
| ·副溶血弧菌 | 第17-18页 |
| ·霍乱弧菌 | 第18页 |
| ·哈维氏弧菌 | 第18-20页 |
| 3.弧菌感染鱼的病理变化 | 第20-23页 |
| ·组织病理变化 | 第20页 |
| ·血液学变化 | 第20-22页 |
| ·免疫学和激素变化 | 第22-23页 |
| 4.细菌中的溶血素(Hemolysin) | 第23-28页 |
| ·RTX毒素家族 | 第24-25页 |
| ·硫醇活性胆固醇结合细胞溶素家族 | 第25页 |
| ·弧菌中的溶血素 | 第25-28页 |
| ·TDH及其相关溶血素 | 第26页 |
| ·HlyA及其相关溶血素 | 第26-27页 |
| ·TLH及其相关溶血素 | 第27-28页 |
| ·δ-VPH及其相关溶血素 | 第28页 |
| 5.细胞凋亡(Apoptosis) | 第28-43页 |
| ·细胞凋亡的激活 | 第29-31页 |
| ·受体介导的信号途径 | 第29-30页 |
| ·细胞周期 | 第30页 |
| ·细胞凋亡的主要器官——线粒体 | 第30-31页 |
| ·细胞凋亡的效应分子 | 第31-32页 |
| ·半胱天冬氨酸酶(Caspase) | 第31-32页 |
| ·Bcl-2家族 | 第32页 |
| ·细菌诱导的细胞凋亡 | 第32-42页 |
| ·成孔毒素 | 第33-35页 |
| ·蛋白合成抑制剂 | 第35-37页 |
| ·Ⅲ型分泌蛋白 | 第37-39页 |
| ·超抗原 | 第39-40页 |
| ·其他因子 | 第40-41页 |
| ·结论 | 第41-42页 |
| ·弧菌引发的细胞凋亡 | 第42-43页 |
| 6.哈维氏弧菌的致病机制 | 第43-44页 |
| 7.本论文研究的目的和意义 | 第44-46页 |
| 第二章 哈维氏弧菌侵染牙鲆的组织病理学、免疫组化及超微结构研究 | 第46-58页 |
| 1.材料与方法 | 第47-51页 |
| ·动物 | 第47页 |
| ·培养基 | 第47页 |
| ·菌株 | 第47页 |
| ·哈维氏弧菌的制备和灭活 | 第47页 |
| ·兔抗哈维氏弧菌免疫血清的制备 | 第47-48页 |
| ·试剂 | 第48页 |
| ·组织病理分析 | 第48页 |
| ·H.E.染色的方法 | 第48-49页 |
| ·间接荧光免疫组织化学 | 第49-50页 |
| ·哈维氏弧菌对牙鲆红细胞作用的电镜观察 | 第50-51页 |
| 2.结果与分析 | 第51-56页 |
| ·组织病理分析 | 第51-53页 |
| ·哈维氏弧菌侵染牙鲆后的荧光免疫组化 | 第53-54页 |
| ·哈维氏弧菌对牙鲆红细胞作用的电镜观察 | 第54-56页 |
| 3.讨论 | 第56-57页 |
| 4.结论 | 第57-58页 |
| 第三章 哈维氏弧菌VHH溶血素对牙鲆组织细胞的侵染及诱导细胞凋亡作用研究 | 第58-101页 |
| 1.材料与方法 | 第61-73页 |
| ·菌株与质粒 | 第61页 |
| ·实验动物和细胞系 | 第61页 |
| ·培养基 | 第61-62页 |
| ·试剂与仪器 | 第62页 |
| ·红细胞的分离 | 第62页 |
| ·牙鲆鳃细胞系FG-9307的培养与传代 | 第62-63页 |
| ·哈维氏弧菌VHH溶血素和VHH突变蛋白的制备 | 第63-65页 |
| ·重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET-24d(+)/vhhA和 | 第63页 |
| ·从菌体中纯化VHH溶血素和VHH突变蛋白 | 第63页 |
| ·Ni琼脂糖亲和柱亲和层析 | 第63页 |
| ·Ni琼脂糖亲和亲和柱的处理与再生 | 第63-64页 |
| ·SDS一PAGE检测重组蛋白纯度 | 第64-65页 |
| ·VHH溶血素蛋白含量的测定 | 第65页 |
| ·VHH溶血素溶血活力的测定 | 第65-66页 |
| ·VHH溶血素磷脂酶活力测定 | 第66页 |
| ·牙鲆红细胞和鳃细胞对VHH溶血素的敏感性比较 | 第66页 |
| ·VHH溶血素作用于牙鲆红细胞的扫描电镜观察 | 第66-67页 |
| ·VHH溶血素作用于牙鲆细胞的透射电镜观察 | 第67页 |
| ·免疫胶体金定位VHH溶血素在细胞膜上的作用位点 | 第67页 |
| ·牙鲆鳃细胞的细胞爬片制作 | 第67-68页 |
| ·VHH溶血素作用于牙鲆鳃细胞的微管染色 | 第68页 |
| ·VHH溶血素诱导牙鲆鳃细胞发生细胞凋亡的研究 | 第68-71页 |
| ·VHH溶血素作用于牙鲆鳃细胞的DAPI染色 | 第68-69页 |
| ·VHH溶血素作用于牙鲆鳃细胞的原位末端标记TUNEL检测 | 第69页 |
| ·VHH溶血素作用于牙鲆鳃细胞的细胞周期和细胞凋亡率分析 | 第69页 |
| ·VHH溶血素作用于牙鲆鳃细胞的Caspase-3的检测 | 第69-71页 |
| ·VHH溶血素和VHH突变蛋白作用于牙鲆的组织病理学变化 | 第71页 |
| ·VHH溶血素和VHH突变蛋白作用于牙鲆的免疫组化分析 | 第71-73页 |
| 2.结果与分析 | 第73-94页 |
| ·哈维氏弧菌VHH溶血素和VHH突变蛋白的制备 | 第73页 |
| ·哈维氏弧菌VHH溶血素蛋白含量测定 | 第73-74页 |
| ·哈维氏弧菌VHH溶血素溶血活力的测定 | 第74-75页 |
| ·哈维氏弧菌VHH溶血素磷脂酶活力的测定 | 第75-76页 |
| ·牙鲆红细胞和鳃细胞系对VHH溶血素的敏感性比较 | 第76页 |
| ·扫描电镜观察VHH溶血素对牙鲆红细胞的作用 | 第76-79页 |
| ·透射电镜观察VHH溶血素对牙鲆红细胞的作用 | 第79-81页 |
| ·免疫胶体金定位VHH溶血素在牙鲆红细胞上的作用位点 | 第81-83页 |
| ·VHH溶血素引起牙鲆鳃细胞的超微结构变化 | 第83-84页 |
| ·免疫胶体金定位VHH溶血素在牙鲆鳃细胞上的作用位点 | 第84-86页 |
| ·VHH溶血素对牙鲆鳃细胞骨架的影响 | 第86页 |
| ·VHH溶血素诱导牙鲆鳃细胞发生细胞凋亡的作用 | 第86-89页 |
| ·DAPI染色 | 第86-87页 |
| ·末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)检测 | 第87-88页 |
| ·流式细胞仪检测 | 第88页 |
| ·Caspase-3活性检测 | 第88-89页 |
| ·VHH溶血素和VHH突变蛋白对牙鲆各组织的侵染作用及免疫定位 | 第89-94页 |
| ·VHH溶血素和VHH突变蛋白对牙鲆的组织病理学影响 | 第89-92页 |
| ·VHH溶血素和VHH突变蛋白在牙鲆组织中的定位 | 第92-94页 |
| 3.讨论 | 第94-100页 |
| 4.结论 | 第100-101页 |
| 本论文创新点 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-123页 |
| 附录Ⅰ 溶液配方 | 第123-125页 |
| 附录Ⅱ 攻读博士期间发表的学术论文 | 第125-126页 |
| 附录Ⅲ 个人简历 | 第126-127页 |
| 致谢 | 第127页 |
