| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 中英文对照及英文缩写词表 | 第7-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-19页 |
| 1 流感病毒概述 | 第11-14页 |
| 1.1 流感病毒生物学特征 | 第11-12页 |
| 1.2 假型病毒技术 | 第12-13页 |
| 1.3 流感假型病毒 | 第13-14页 |
| 2 IFITM家族研究进展 | 第14-18页 |
| 2.1 几种ISGs产物影响病毒进入细胞的机制 | 第14-15页 |
| 2.2 IFITMs家族概述 | 第15-16页 |
| 2.3 IFITMs家族拓扑结构与定位 | 第16-17页 |
| 2.4 IFITM3抗流感病毒研究进展 | 第17-18页 |
| 3 本论文立题依据、目的和意义 | 第18页 |
| 4 论文研究内容 | 第18-19页 |
| 第二章 人IFITM3诱导表达细胞株的建立 | 第19-32页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第19-20页 |
| 1.1 材料 | 第19页 |
| 1.2 试剂 | 第19-20页 |
| 1.3 仪器和设备 | 第20页 |
| 2 实验方法 | 第20-26页 |
| 2.1 人IFITM3蛋白真核表达质粒的构建 | 第20-21页 |
| 2.2 pLVX-TRE3G-IFITM3质粒的大量制备 | 第21-22页 |
| 2.3 MDCK细胞培养 | 第22页 |
| 2.4 细胞对G418敏感性分析 | 第22页 |
| 2.5 双质粒共转染构建诱导表达细胞系 | 第22-23页 |
| 2.6 RT-PCR检测目的基因IFITM3的表达 | 第23-24页 |
| 2.7 Western blot检测外源IFITM3蛋白的表达 | 第24页 |
| 2.8 细胞对Dox敏感性分析 | 第24-25页 |
| 2.9 Dox对细胞毒性分析（MTS法） | 第25页 |
| 2.10 Dox诱导IFITM3+细胞率分析 | 第25页 |
| 2.11 间接免疫荧光分析 | 第25-26页 |
| 3 实验结果 | 第26-30页 |
| 3.1 pLVX-TRE3G-IFITM3质粒的构建与鉴定 | 第26页 |
| 3.2 细胞对G418敏感性 | 第26-27页 |
| 3.3 人IFITM3诱导表达细胞株RT-PCR鉴定 | 第27页 |
| 3.4 人IFITM3诱导表达细胞株Western blot鉴定 | 第27-28页 |
| 3.5 细胞对Dox敏感性分析 | 第28页 |
| 3.6 Dox对细胞毒性分析 | 第28-29页 |
| 3.7 Dox诱导IFITM3+细胞率 | 第29页 |
| 3.8 IFITM3的定位分析 | 第29-30页 |
| 4 讨论 | 第30-31页 |
| 5 小结 | 第31-32页 |
| 第三章 H5N9和H7N9亚型假型病毒颗粒的制备 | 第32-44页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第32-33页 |
| 1.1 材料 | 第32页 |
| 1.2 试剂 | 第32-33页 |
| 1.3 仪器与设备 | 第33页 |
| 2 实验方法 | 第33-38页 |
| 2.1 H5N1亚型流感病毒的扩增 | 第33页 |
| 2.2 H5N1亚型流感病毒TCID50测定 | 第33-34页 |
| 2.3 H5N1亚型流感病毒HA基因cDNA模板的获取 | 第34页 |
| 2.4 引物设计与合成 | 第34-35页 |
| 2.5 目的基因的扩增 | 第35-36页 |
| 2.6 分别含有HA5、HA7和NA9的pcDNA-3.1 表达质粒构建 | 第36页 |
| 2.7 pCMV-Luc2报告质粒的构建 | 第36页 |
| 2.8 流感病毒囊膜蛋白表达质粒转染293细胞 | 第36页 |
| 2.9 质粒表达鉴定 | 第36-37页 |
| 2.10 流感病毒H5N9和H7N9亚型假病毒颗粒的制备 | 第37页 |
| 2.11 假型病毒颗粒HA以及P24蛋白在包装细胞中表达鉴定 | 第37页 |
| 2.12 流感假病毒感染活性检测 | 第37-38页 |
| 3 实验结果 | 第38-42页 |
| 3.1 间接免疫荧光法测定H5N1亚型流感病毒的TCID50 | 第38-39页 |
| 3.2 流感病毒HA5、HA7以及NA9基因的扩增 | 第39页 |
| 3.3 含有流感病毒HA5、HA7和NA9的表达质粒的构建 | 第39-40页 |
| 3.4 pCMV-Luc2报告质粒的构建 | 第40页 |
| 3.5 流感病毒HA5、HA7和NA9质粒表达的鉴定 | 第40-41页 |
| 3.6 假型病毒颗粒HA以及P24蛋白在包装细胞中表达鉴定 | 第41页 |
| 3.7 流感假型病毒颗粒的感染活性鉴定 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-43页 |
| 5 小结 | 第43-44页 |
| 第四章 人IFITM3对HA介导的病毒进入抑制活性分析 | 第44-57页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第44-45页 |
| 1.1 材料 | 第44页 |
| 1.2 试剂 | 第44页 |
| 1.3 仪器与设备 | 第44-45页 |
| 2 实验方法 | 第45-48页 |
| 2.1 H5N1亚型流感病毒鉴定引物的设计与合成 | 第45页 |
| 2.2 H5N1亚型流感病毒实时荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第45-46页 |
| 2.3 荧光定量PCR分析IFITM3对H5N1感染的作用 | 第46页 |
| 2.4 MTT分析IFITM3对H5N1亚型流感病毒感染的作用 | 第46页 |
| 2.5 siRNA干扰实验 | 第46-47页 |
| 2.6 敲低IFITM3基因对病毒感染的影响 | 第47页 |
| 2.7 DiOC18分子标记H5N1亚型流感病毒百分数 | 第47页 |
| 2.8 IFITM3对H5N1亚型流感病毒融合阶段的抑制作用 | 第47-48页 |
| 2.9 萤光素酶活性分析IFITM3对HA介导的病毒进入抑制作用 | 第48页 |
| 2.10 统计学分析 | 第48页 |
| 3 实验结果 | 第48-54页 |
| 3.1 H5N1亚型流感病毒实时荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第48-50页 |
| 3.2 qPCR分析IFITM3对H5N1亚型流感病毒感染的抑制作用 | 第50-51页 |
| 3.3 MTT分析IFITM3对H5N1亚型流感病毒感染的抑制作用 | 第51页 |
| 3.4 siRNA对IFITM3基因敲低效率检测 | 第51-52页 |
| 3.5 敲低IFITM3基因对流感病毒感染影响 | 第52页 |
| 3.6 DiOC18分子标记H5N1亚型流感病毒百分数 | 第52-53页 |
| 3.7 分子示踪法检测IFITM3对病毒融合阶段的抑制作用 | 第53-54页 |
| 3.8 萤光素酶活性分析IFITM3对HA介导的病毒进入抑制作用 | 第54页 |
| 4 讨论 | 第54-55页 |
| 5 小结 | 第55-57页 |
| 全文总结 | 第57页 |
| 参考文献 | 第57-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
