| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 文献综述 | 第12-23页 |
| 第一章 禽脑脊髓炎研究进展 | 第12-18页 |
| 1.1 AEV病原学特征 | 第12-15页 |
| 1.1.1 AEV的历史背景与分类 | 第12页 |
| 1.1.2 病毒的形态特征及理化性质 | 第12-13页 |
| 1.1.3 病毒的增殖培养 | 第13页 |
| 1.1.4 AEV基因组 | 第13-14页 |
| 1.1.5VP1蛋白及功能 | 第14页 |
| 1.1.6 AEV VP1蛋白抗原表位分析 | 第14-15页 |
| 1.2 AE的流行病学 | 第15-16页 |
| 1.3 AEV致病机理 | 第16页 |
| 1.4 AE临床症状和病理变化 | 第16页 |
| 1.5 AEV检测 | 第16-17页 |
| 1.6 AE的防制 | 第17-18页 |
| 第二章 纳米抗体研究进展 | 第18-23页 |
| 2.1 纳米抗体的结构 | 第18-19页 |
| 2.2 纳米抗体的性质 | 第19-20页 |
| 2.2.1 亲和力高 | 第19页 |
| 2.2.2 高稳定性和水溶性 | 第19-20页 |
| 2.2.3 识别独特的抗原表位 | 第20页 |
| 2.2.4 容易表达和规模化生产 | 第20页 |
| 2.2.5 易多聚化成多价抗体 | 第20页 |
| 2.3 纳米抗体的应用 | 第20-23页 |
| 2.3.1 在基础研究领域的应用 | 第20-21页 |
| 2.3.2 作为诊断工具的使用 | 第21-23页 |
| 实验研究 | 第23-48页 |
| 第三章 禽脑脊髓炎病毒VP1蛋白纳米抗体的筛选 | 第23-35页 |
| 3.1 材料 | 第23-25页 |
| 3.1.1 菌株、质粒、文库 | 第23页 |
| 3.1.2 引物 | 第23-24页 |
| 3.1.3 酶和试剂 | 第24页 |
| 3.1.4 主要培养基及常用试剂的配制 | 第24-25页 |
| 3.1.5 主要仪器 | 第25页 |
| 3.2 方法 | 第25-28页 |
| 3.2.1 pBD-VP1诱饵质粒的构建 | 第25-27页 |
| 3.2.2 诱饵质粒pBD-VP1毒性和自激活检测 | 第27页 |
| 3.2.3 文库筛选与鉴定 | 第27-28页 |
| 3.3 结果 | 第28-33页 |
| 3.3.1 AEV VP1基因扩增 | 第28-29页 |
| 3.3.2 诱饵质粒PCR和双酶切鉴定 | 第29页 |
| 3.3.3 诱饵质粒pBD-VP1测序 | 第29-30页 |
| 3.3.4 诱饵质粒pBD-VP1自激活检测 | 第30页 |
| 3.3.5 文库筛选 | 第30-31页 |
| 3.3.6 蓝色菌落进行菌落PCR鉴定 | 第31页 |
| 3.3.7 共转验证 | 第31-32页 |
| 3.3.8 阳性文库质粒测序 | 第32-33页 |
| 3.4 讨论 | 第33-34页 |
| 3.5 小结 | 第34-35页 |
| 第四章 禽脑脊髓炎病毒VP1蛋白纳米抗体的表达纯化与活性检测 | 第35-48页 |
| 4.1 材料 | 第35-36页 |
| 4.1.1 质粒、载体和菌株 | 第35页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第35页 |
| 4.1.3 常用缓冲液配制 | 第35-36页 |
| 4.1.4 主要仪器设备 | 第36页 |
| 4.2 方法 | 第36-41页 |
| 4.2.1 pET28as-VHH表达载体的构建 | 第36-39页 |
| 4.2.2 诱导表达纳米抗体 | 第39-40页 |
| 4.2.3 纳米抗体的制备纯化 | 第40页 |
| 4.2.4 间接ELISA检测VHH的活性 | 第40-41页 |
| 4.2.5 鸡胚中和试验检测VHH的活性 | 第41页 |
| 4.3 结果 | 第41-47页 |
| 4.3.1 pET28as-VHH表达载体的PCR鉴定 | 第41页 |
| 4.3.2 pET28as-VHH表达载体的酶切鉴定 | 第41-42页 |
| 4.3.3 pET28as-VHH表达载体测序 | 第42-43页 |
| 4.3.4 pET28as-VHH重组蛋白存在形式的检测 | 第43页 |
| 4.3.5 IPTG最佳诱导温度的确定 | 第43-44页 |
| 4.3.6 IPTG最佳诱导浓度的确定 | 第44页 |
| 4.3.7 最佳诱导时间的确定 | 第44-45页 |
| 4.3.8 重组VHH的表达与纯化 | 第45-46页 |
| 4.3.9 a重组VHH与AEV的反应活性 | 第46页 |
| 4.3.410 b鸡胚中和试验测定VHH活性 | 第46-47页 |
| 4.4 讨论 | 第47页 |
| 4.5 小结 | 第47-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-56页 |
| 附录 | 第56-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简介 | 第61页 |
