| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第11-24页 |
| 1.1 角蛋白简介 | 第11页 |
| 1.2 角蛋白酶研究概况 | 第11-16页 |
| 1.2.1 角蛋白酶的来源 | 第11-12页 |
| 1.2.2 角蛋白酶的性质 | 第12-16页 |
| 1.3 角蛋白酶的克隆表达及改造研究 | 第16-19页 |
| 1.3.1 克隆表达 | 第16-17页 |
| 1.3.2 分子改造研究 | 第17-19页 |
| 1.4 角蛋白酶的作用机理 | 第19-20页 |
| 1.4.1 硫解作用理论 | 第19页 |
| 1.4.2 膜电位理论 | 第19页 |
| 1.4.3 多种酶协作理论 | 第19-20页 |
| 1.5 角蛋白酶的应用潜力 | 第20-22页 |
| 1.5.1 在制革行业的应用 | 第20-21页 |
| 1.5.2 在洗涤剂行业的应用 | 第21-22页 |
| 1.5.3 其他应用 | 第22页 |
| 1.6 本课题的立项依据和主要内容 | 第22-24页 |
| 1.6.1 立项依据和研究意义 | 第22-23页 |
| 1.6.2 主要研究内容 | 第23-24页 |
| 第二章 产角蛋白酶菌株的筛选、鉴定及产酶特性研究 | 第24-41页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 材料和方法 | 第24-28页 |
| 2.2.1 样品来源 | 第24页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第24-25页 |
| 2.2.3 主要仪器及设备 | 第25页 |
| 2.2.4 培养基和培养条件 | 第25-26页 |
| 2.2.5 产角蛋白酶菌株的筛选 | 第26页 |
| 2.2.6 酶活测定 | 第26页 |
| 2.2.7 菌株形态及生理生化鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2.8 菌株的分子生物学鉴定 | 第27-28页 |
| 2.2.9 微生物角蛋白酶的脱毛应用初探 | 第28页 |
| 2.2.10 产酶条件研究 | 第28页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第28-39页 |
| 2.3.1 产酶微生物的筛选 | 第28-31页 |
| 2.3.2 产角蛋白酶菌株的鉴定 | 第31-34页 |
| 2.3.3 野生菌产酶特征和应用的初步评价 | 第34-39页 |
| 2.4 本章小结 | 第39-41页 |
| 第三章 B. parabrevis角蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究 | 第41-52页 |
| 3.1 前言 | 第41页 |
| 3.2 材料和方法 | 第41-44页 |
| 3.2.1 菌株和培养基 | 第41页 |
| 3.2.2 主要仪器及试剂 | 第41页 |
| 3.2.3 实验方法 | 第41-44页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第44-51页 |
| 3.3.1 B. parabrevis角蛋白酶的分离纯化 | 第44-47页 |
| 3.3.2 B. parabrevis角蛋白酶的酶学性质研究 | 第47-50页 |
| 3.3.3 酶反应动力学 | 第50-51页 |
| 3.4 本章小结 | 第51-52页 |
| 第四章 B. parabrevis角蛋白酶基因的克隆及异源表达 | 第52-68页 |
| 4.1 前言 | 第52页 |
| 4.2 材料和方法 | 第52-56页 |
| 4.2.1 菌株和质粒 | 第52页 |
| 4.2.2 试剂与仪器 | 第52-53页 |
| 4.2.3 培养基和培养条件 | 第53页 |
| 4.2.4 实验方法 | 第53-54页 |
| 4.2.5 重组角蛋白酶的纯化 | 第54-55页 |
| 4.2.6 分析方法 | 第55-56页 |
| 4.2.7 重组角蛋白酶在制革脱毛中的应用 | 第56页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第56-67页 |
| 4.3.1 角蛋白酶编码基因的克隆及序列分析 | 第56-58页 |
| 4.3.2 表达载体pET-22b(+)-kerbp的构建 | 第58-59页 |
| 4.3.3 角蛋白酶在E. coli BL21中的表达 | 第59-60页 |
| 4.3.4 重组角蛋白酶的分离纯化 | 第60页 |
| 4.3.5 重组角蛋白酶的酶学性质研究 | 第60-63页 |
| 4.3.6 重组角蛋白酶的应用研究 | 第63-67页 |
| 4.4 本章小节 | 第67-68页 |
| 第五章 基于计算机辅助的角蛋白酶分子改造研究 | 第68-83页 |
| 5.1 引言 | 第68页 |
| 5.2 材料和方法 | 第68-71页 |
| 5.2.1 菌株和质粒 | 第68页 |
| 5.2.2 主要试剂材料与仪器 | 第68页 |
| 5.2.3 培养基与培养条件 | 第68页 |
| 5.2.4 角蛋白酶突变体的构建 | 第68-69页 |
| 5.2.5 突变酶的分离纯化 | 第69页 |
| 5.2.6 角蛋白酶同源模型的构建与评价 | 第69-70页 |
| 5.2.7 分析方法 | 第70-71页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第71-82页 |
| 5.3.1 角蛋白酶三维结构的模拟及模型的评估 | 第71-72页 |
| 5.3.2 突变位点的预测及选择 | 第72-74页 |
| 5.3.3 单点突变对酶学特征的影响 | 第74-76页 |
| 5.3.4 组合突变对酶学特征的影响 | 第76-77页 |
| 5.3.5 突变对酶动力学的影响 | 第77页 |
| 5.3.6 野生酶和突变酶的三维立体结构分析 | 第77-82页 |
| 5.4 本章小结 | 第82-83页 |
| 主要结论与展望 | 第83-85页 |
| 主要结论 | 第83-84页 |
| 展望 | 第84-85页 |
| 论文创新点 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-95页 |
| 附录Ⅰ: 作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第95-96页 |
| 附录Ⅱ: 角蛋白酶产生菌的 16S rRNA基因序列 | 第96-97页 |
