| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 绪论 | 第13-21页 |
| 1.1 精子发生 | 第13-14页 |
| 1.2 生精细胞凋亡 | 第14-15页 |
| 1.3 大肠杆菌表达系统 | 第15-18页 |
| 1.3.1 表达载体 | 第15-16页 |
| 1.3.2 宿主细胞 | 第16-17页 |
| 1.3.3 诱导条件 | 第17-18页 |
| 1.4 Spata34和Mage-k1基因简述 | 第18-20页 |
| 1.4.1 Spata34基因简述 | 第18页 |
| 1.4.2 Mage-k1基因简述 | 第18-20页 |
| 1.5 研究背景及意义 | 第20-21页 |
| 第2章 实验材料与仪器 | 第21-28页 |
| 2.1 实验动物 | 第21页 |
| 2.2 菌株 | 第21-22页 |
| 2.2.1 E.coli Top10 | 第21页 |
| 2.2.2 E.coli DH-5α | 第21页 |
| 2.2.3 BL21 | 第21-22页 |
| 2.2.4 Rosetta | 第22页 |
| 2.3 质粒载体 | 第22-24页 |
| 2.3.1 pMD18-T载体 | 第22-23页 |
| 2.3.2 pEGFP-C3载体 | 第23页 |
| 2.3.3 pGEX-4T-2 载体 | 第23-24页 |
| 2.3.4 pET28b载体 | 第24页 |
| 2.4 试剂 | 第24-26页 |
| 2.4.1 酶及主要试剂 | 第24-25页 |
| 2.4.2 试剂盒 | 第25页 |
| 2.4.3 分子量标准 | 第25-26页 |
| 2.5 主要仪器 | 第26页 |
| 2.6 PCR引物 | 第26-28页 |
| 2.6.1 GAPDH引物 | 第26页 |
| 2.6.2 基因克隆引物 | 第26-27页 |
| 2.6.3 基因表达引物 | 第27-28页 |
| 第3章 实验方法 | 第28-53页 |
| 3.1 Spata34和Mage-k1基因的生物信息学分析 | 第29-30页 |
| 3.1.1 蛋白同源性比对 | 第29页 |
| 3.1.2 核酸/蛋白相似性比对 | 第29页 |
| 3.1.3 阅读框识别 | 第29页 |
| 3.1.4 数字化表达谱分析 | 第29页 |
| 3.1.5 基因染色体定位 | 第29页 |
| 3.1.6 外显子分析 | 第29页 |
| 3.1.7 酶切位点分析 | 第29-30页 |
| 3.1.8 蛋白质理化性质分析 | 第30页 |
| 3.1.9 蛋白质跨膜区分析 | 第30页 |
| 3.1.10 蛋白质疏水性分析 | 第30页 |
| 3.1.11 信号肽分析 | 第30页 |
| 3.1.12 蛋白质亚细胞定位预测 | 第30页 |
| 3.1.13 蛋白质二级结构预测 | 第30页 |
| 3.1.14 蛋白质motif分析 | 第30页 |
| 3.1.15 蛋白质结构域分析 | 第30页 |
| 3.2 Spata34和Mage-k1基因的分子克隆 | 第30-37页 |
| 3.2.1 睾丸组织RNA的抽提 | 第30-31页 |
| 3.2.2 半定量RT-PCR扩增 | 第31-32页 |
| 3.2.3 新基因克隆 | 第32-33页 |
| 3.2.4 新基因高保真克隆 | 第33页 |
| 3.2.5 新基因TA克隆 | 第33-34页 |
| 3.2.6 重组子转化 | 第34-35页 |
| 3.2.7 阳性克隆的筛选及鉴定 | 第35-36页 |
| 3.2.8 重组质粒抽提 | 第36-37页 |
| 3.3 Mage-k1基因的表达谱分析 | 第37-38页 |
| 3.3.1 多组织RT-PCR表达谱 | 第37页 |
| 3.3.2 小鼠不同发育时期睾丸组织RT-PCR表达谱 | 第37-38页 |
| 3.4 Spata34/pEGFP-C3真核表达载体构建 | 第38-42页 |
| 3.4.1 大鼠Spata34基因的PCR扩增 | 第38-39页 |
| 3.4.2 pMD18-T/Spata34的克隆、转化与鉴定 | 第39页 |
| 3.4.3 pMD18-T/Spata34和pEGFP-C3质粒双酶切 | 第39-40页 |
| 3.4.4 目的片段胶回收纯化 | 第40-41页 |
| 3.4.5 pEGFP-C3/Spata34重组质粒的连接与转化 | 第41页 |
| 3.4.6 pEGFP-C3/Spata34重组质粒的鉴定 | 第41-42页 |
| 3.5 Mage-k1/pGEX-4T-2 原核表达载体构建 | 第42-44页 |
| 3.5.1 小鼠Mage-k1基因的PCR扩增 | 第42页 |
| 3.5.2 pMD18-T/ Mage-k1的克隆、转化与鉴定 | 第42-43页 |
| 3.5.3 pMD18-T/ Mage-k1和pGEX-4T-2 质粒双酶切 | 第43-44页 |
| 3.5.4 Mage-k1/pGEX-4T-2 重组质粒的连接与转化 | 第44页 |
| 3.5.5 Mage-k1/pGEX-4T-2 重组质粒的鉴定 | 第44页 |
| 3.6 Mage-k1/pET28b原核表达载体构建 | 第44-46页 |
| 3.6.1 小鼠Mage-k1基因的亚克隆 | 第44-45页 |
| 3.6.2 Mage-k1/pET28b原核表达载体构建 | 第45-46页 |
| 3.7 组织原位杂交试验 | 第46-47页 |
| 3.8 Spata34蛋白的亚细胞定位 | 第47-48页 |
| 3.8.1 细胞培养 | 第47-48页 |
| 3.8.2 转染细胞 | 第48页 |
| 3.9 融合蛋白的表达和分离纯化 | 第48-53页 |
| 3.9.1 融合蛋白的诱导表达 | 第48-49页 |
| 3.9.2 SDS-PAGE电泳 | 第49-50页 |
| 3.9.3 融合蛋白的亲和层析纯化 | 第50-52页 |
| 3.9.4 融合蛋白的酶切纯化 | 第52-53页 |
| 第4章 结果与讨论 | 第53-100页 |
| 4.1 Spata34基因的克隆及功能的初步研究 | 第53-78页 |
| 4.1.1 Spata34基因的生物信息学分析 | 第53-69页 |
| 4.1.2 Spata34基因的分子克隆 | 第69-71页 |
| 4.1.3 Spata34基因的多组织RT-PCR验证 | 第71-73页 |
| 4.1.4 Spata34/pEGFP-C3真核表达载体构建 | 第73-75页 |
| 4.1.5 Spata34蛋白的亚细胞定位 | 第75-76页 |
| 4.1.6 Spata34基因组织原位杂交 | 第76-77页 |
| 4.1.7 pET28b/Spata34融合蛋白的表达和分离纯化 | 第77-78页 |
| 4.2 Mage-k1基因的克隆及功能的初步研究 | 第78-100页 |
| 4.2.1 Mage-k1基因的生物信息学分析 | 第78-89页 |
| 4.2.2 Mage-k1基因的分子克隆 | 第89-91页 |
| 4.2.3 Mage-k1基因的表达谱分析 | 第91-93页 |
| 4.2.4 Mage-k1/pGEX-4T-2 原核表达载体构建 | 第93-95页 |
| 4.2.5 Mage-k1/pET28b原核表达载体构建 | 第95-97页 |
| 4.2.6 Mage-k1基因组织原位杂交试验 | 第97页 |
| 4.2.7 Mage-k1/pET28b融合蛋白的表达和分离纯化 | 第97-100页 |
| 第5章 结语 | 第100-102页 |
| 5.1 结论 | 第100-101页 |
| 5.2 展望 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-108页 |
| 附录 | 第108-111页 |
| 攻读硕士学位期间主要的研究成果 | 第111-112页 |
| 致谢 | 第112页 |
