| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-18页 |
| 1.1 氨肽酶概述 | 第9-12页 |
| 1.1.1 氨肽酶来源 | 第9页 |
| 1.1.2 氨肽酶分类 | 第9-10页 |
| 1.1.3 氨肽酶应用 | 第10-12页 |
| 1.2 氨肽酶研究进展 | 第12-14页 |
| 1.2.1 国外研究进展 | 第12-13页 |
| 1.2.2 国内研究进展 | 第13-14页 |
| 1.3 大肠杆菌表达系统 | 第14-15页 |
| 1.3.1 大肠杆菌表达系统的构成 | 第14-15页 |
| 1.3.2 大肠杆菌表达系统的优缺点 | 第15页 |
| 1.3.3 pET表达系统 | 第15页 |
| 1.4 定向突变 | 第15-16页 |
| 1.5 立题意义 | 第16-17页 |
| 1.6 研究内容 | 第17-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-27页 |
| 2.1 材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第18页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第18-19页 |
| 2.1.4 培养基与溶液 | 第19-20页 |
| 2.2 方法 | 第20-27页 |
| 2.2.1 P.aeruginosa NJ-814 全基因组的提取 | 第20页 |
| 2.2.2 氨肽酶编码基因的克隆 | 第20页 |
| 2.2.3 PCR产物的纯化与验证 | 第20-21页 |
| 2.2.4 目的基因和质粒的连接 | 第21页 |
| 2.2.5 E. coli感受态的制备 | 第21页 |
| 2.2.6 热激转化 | 第21-22页 |
| 2.2.7 阳性转化子的筛选 | 第22页 |
| 2.2.8 重组质粒的提取与验证 | 第22页 |
| 2.2.9 重组酶的诱导表达及验证 | 第22-23页 |
| 2.2.10 重组菌菌体浓度的测定 | 第23页 |
| 2.2.11 重组酶酶活测定方法 | 第23页 |
| 2.2.12 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第23页 |
| 2.2.13 重组酶的分离纯化 | 第23-24页 |
| 2.2.14 重组酶的酶学性质 | 第24-25页 |
| 2.2.15 重组酶胞外表达措施 | 第25页 |
| 2.2.16 重组酶诱导条件和发酵条件优化 | 第25页 |
| 2.2.17 全质粒PCR定向突变 | 第25-26页 |
| 2.2.18 应用初探 | 第26-27页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第27-50页 |
| 3.1 重组赖氨酸氨肽酶表达菌株的构建 | 第27-31页 |
| 3.1.1 重组质粒的构建 | 第27-29页 |
| 3.1.2 重组质粒转化表达 | 第29-31页 |
| 3.2 胞外分泌策略 | 第31-33页 |
| 3.3 酶学性质研究 | 第33-38页 |
| 3.3.1 最适反应pH和pH稳定性 | 第33页 |
| 3.3.2 最适反应温度和温度稳定性 | 第33-34页 |
| 3.3.3 金属离子和抑制剂对酶活的影响 | 第34-36页 |
| 3.3.4 底物特异性和动力学分析 | 第36-37页 |
| 3.3.5 质谱分析 | 第37-38页 |
| 3.4 重组菌产酶诱导条件的优化 | 第38-41页 |
| 3.4.1 诱导温度的影响 | 第38-39页 |
| 3.4.2 诱导剂浓度的影响 | 第39-40页 |
| 3.4.3 诱导时机的影响 | 第40-41页 |
| 3.5 重组菌产酶发酵条件的优化 | 第41-45页 |
| 3.5.1 碳氮源 | 第41-42页 |
| 3.5.2 金属离子 | 第42-43页 |
| 3.5.3 初始pH | 第43页 |
| 3.5.4 转速 | 第43-44页 |
| 3.5.5 接种量 | 第44-45页 |
| 3.5.6 装液量 | 第45页 |
| 3.6 定向突变 | 第45-48页 |
| 3.7 重组酶的应用初探 | 第48-50页 |
| 主要结论与展望 | 第50-52页 |
| 主要结论 | 第50-51页 |
| 展望 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第57-58页 |