| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 引言 | 第9-17页 |
| ·稻飞虱 | 第9-10页 |
| ·稻飞虱危害 | 第10页 |
| ·稻飞虱抗药性 | 第10-11页 |
| ·转苏云金芽胞杆菌cry1A 基因水稻 | 第11-14页 |
| ·转cry1A 基因水稻与稻飞虱 | 第14-16页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-29页 |
| 1 材料 | 第17-20页 |
| ·供试菌株 | 第17页 |
| ·质粒载体 | 第17页 |
| ·酶与试剂 | 第17-19页 |
| ·培养基与人工饲料 | 第19-20页 |
| ·试虫 | 第20页 |
| 2 方法 | 第20-29页 |
| ·重组菌pET32a-cry1Aa21 原核表达体系构建 | 第20-28页 |
| ·Bt 总DNA 的提取 | 第20页 |
| ·Bt cry1Aa21 基因全长的扩增 | 第20-22页 |
| ·Bt cry1Aa21 引物设计 | 第20-21页 |
| ·PCR 体系 | 第21页 |
| ·PCR 循环条件 | 第21页 |
| ·PCR 产物回收 | 第21-22页 |
| ·片段与克隆载体pMD18-T 连接 | 第22-24页 |
| ·连接反应 | 第22页 |
| ·大肠埃希氏菌感受态细胞的制备 | 第22-23页 |
| ·转化和筛选 | 第23页 |
| ·碱裂解法提取质粒 | 第23页 |
| ·克隆质粒的 PCR 快速鉴定 | 第23-24页 |
| ·基因片段测序 | 第24页 |
| ·cry1Aa21 与表达载体pET-32a 重组 | 第24-27页 |
| ·pMD18T-cry1Aa21 重组质粒双酶切 | 第24页 |
| ·双酶切产物回收 | 第24-25页 |
| ·载体双酶切 | 第25-26页 |
| ·cry1Aa21 与表达载体pET-32a 连接 | 第26页 |
| ·转化和筛选 | 第26页 |
| ·提取重组菌质粒 | 第26页 |
| ·PCR 快速验证 | 第26页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第26-27页 |
| ·目的蛋白的表达 | 第27-28页 |
| ·目的蛋白的IPTG 诱导 | 第27页 |
| ·重组菌蛋白提取 | 第27页 |
| ·原毒素的胰蛋白酶活化 | 第27页 |
| ·SDS-PAGE 检测 | 第27-28页 |
| ·小菜蛾生物测定 | 第28-29页 |
| ·褐飞虱生物测定 | 第29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-39页 |
| ·pET32a-cry1Aa21 重组菌构建及诱导表达 | 第29-34页 |
| ·pMD18T-cry1Aa21 重组菌验证 | 第29-30页 |
| ·pET32a-cry1Aa21 重组质粒验证 | 第30页 |
| ·cry1Aa21 序列分析 | 第30-32页 |
| ·重组菌IPTG 诱导表达 | 第32-34页 |
| ·小菜蛾生物测定 | 第34-35页 |
| ·褐飞虱生物测定 | 第35-39页 |
| ·取食研究 | 第35页 |
| ·纯人工饲料饲喂褐飞虱 | 第35-36页 |
| ·Cry1Aa21 蛋白和HD-1 晶体蛋白对褐飞虱死亡率的影响 | 第36-39页 |
| ·经胰蛋白酶处理的蛋白样品对褐飞虱生物活性 | 第39页 |
| 4 讨论 | 第39-41页 |
| ·蛋白的选择 | 第39页 |
| ·褐飞虱膜饲喂生测方法 | 第39-40页 |
| ·Cry1A 蛋白在褐飞虱肠道行为 | 第40页 |
| ·展望 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-44页 |
| 致谢 | 第44页 |
