| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 水椰八角铁甲的危害性以及入侵现状 | 第12-14页 |
| 1.2 椰扁甲啮小蜂的生物学特性 | 第14页 |
| 1.3 寄生蜂毒液对寄主的免疫抑制作用 | 第14-15页 |
| 1.4 丝氨酸蛋白酶级联反应介导的黑化反应 | 第15-17页 |
| 1.5 酚氧化酶原激活因子PPAF的结构与功能 | 第17-19页 |
| 1.6 丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin的组成及功能 | 第19-20页 |
| 1.7 本文研究的目的及意义 | 第20-22页 |
| 2 OnPPAF1、Onserpin6及Tbserpin6的序列特征分析 | 第22-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 昆虫的采集与饲养 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂及仪器 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-28页 |
| 2.2.1 总RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.2 Tbserpin6、Onserpin6和OnPPAF1的3'末端序列的快速扩增(3'RACE) | 第24-25页 |
| 2.2.3 Tbserpin6、Onserpin6和OnPPAF1的5'末端序列的快速扩增(5'RACE) | 第25-26页 |
| 2.2.4 Tbserpin6、Onserpin6和OnPPAF1全长序列的验证 | 第26-28页 |
| 2.2.5 序列分析 | 第28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-38页 |
| 2.3.1 椰扁甲啮小蜂毒液蛋白Tbserpin6和水椰八角铁甲Onserpin6、OnPPAF1的全长验证 | 第28-30页 |
| 2.3.2 OnPPAF1的序列及系统进化分析 | 第30-34页 |
| 2.3.3 Onserpin6和Tbserpin6的序列及系统进化分析 | 第34-38页 |
| 2.3.4 Onserpin6和Tbserpin6的三级结构 | 第38页 |
| 2.3.5 序列分析结果 | 第38页 |
| 2.4 讨论 | 第38-40页 |
| 3 水椰八角铁甲OnPPAF1及Onserpin6在原酚氧化酶激活反应中的作用 | 第40-49页 |
| 3.1 实验材料 | 第40-41页 |
| 3.1.1 实验昆虫 | 第40页 |
| 3.1.2 主要试剂及仪器 | 第40-41页 |
| 3.2 实验方法 | 第41-45页 |
| 3.2.1 含T7启动子的模板DNA的制备 | 第41-42页 |
| 3.2.2 总RNA的提取及cDNA第一链的合成 | 第42页 |
| 3.2.3 dsRNA模板的制备 | 第42页 |
| 3.2.4 dsRNA的制备 | 第42-43页 |
| 3.2.5 dsRNA显微注射 | 第43页 |
| 3.2.6 基因沉默效率的检测 | 第43-44页 |
| 3.2.7 注射dsRNA后血淋巴酚氧化酶活性及黑化反应的变化 | 第44-45页 |
| 3.3 结果与分析 | 第45-47页 |
| 3.3.1 dsRNA的质量检测 | 第45-46页 |
| 3.3.2 dsRNA沉默效率的检测 | 第46-47页 |
| 3.3.3 OnPPAF1及Onserpin6在酚氧化酶反应中的作用验证 | 第47页 |
| 3.4 讨论 | 第47-49页 |
| 4 椰扁甲啮小蜂毒液蛋白Tbserpin6对水椰八角铁甲蛹酚氧化酶酶活的抑制作用分析 | 第49-65页 |
| 4.1 实验材料 | 第49-51页 |
| 4.1.1 菌种与质粒 | 第49-50页 |
| 4.1.2 主要试剂及仪器 | 第50-51页 |
| 4.2 实验方法 | 第51-58页 |
| 4.2.1 OnPPAF1-Xa突变体的构建 | 第51-52页 |
| 4.2.2 Tbserpin6和Onserpin6重组质粒的构建 | 第52-53页 |
| 4.2.3 重组蛋白的表达及纯化 | 第53-56页 |
| 4.2.4 重组蛋白的活性验证 | 第56-58页 |
| 4.3 结果与分析 | 第58-63页 |
| 4.3.1 重组质粒的原核表达 | 第58-60页 |
| 4.3.2 重组蛋白的活性检测 | 第60-61页 |
| 4.3.3 Onserpin6和Tbserpin6与OnPPAF1的互作效率 | 第61-62页 |
| 4.3.4 Onserpin6和Tbserpin6对水椰八角铁甲蛹血淋巴黑化反应的抑制 | 第62-63页 |
| 4.4 讨论 | 第63-65页 |
| 5 总结与展望 | 第65-67页 |
| 5.1 总结 | 第65页 |
| 5.2 本研究的创新之处 | 第65-66页 |
| 5.3 本论文存在的不足之处 | 第66页 |
| 5.4 展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-77页 |
| 附录 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第77-79页 |
| 攻读硕士学位期间所获的科研成果 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
