| 符号说明 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 1 前言 | 第14-27页 |
| ·棉蚜抗药性研究概况 | 第14-16页 |
| ·棉蚜对各种常规药剂的抗药性进展 | 第14-16页 |
| ·吡虫啉等新烟碱类杀虫剂的抗性研究 | 第16页 |
| ·棉蚜抗药性机制研究 | 第16-20页 |
| ·行为抗性机制 | 第17页 |
| ·生理生化抗性机制 | 第17-20页 |
| ·细胞色素单氧化酶P450概述 | 第20-23页 |
| ·细胞色素P450基因的命名 | 第21页 |
| ·细胞色素P450酶蛋白结构及反应机理 | 第21-22页 |
| ·细胞色素P450酶与昆虫抗药性 | 第22-23页 |
| ·细胞色素P450酶异源表达研究 | 第23-26页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第23-24页 |
| ·酵母表达系统 | 第24页 |
| ·哺乳动物细胞表达系统 | 第24-25页 |
| ·杆状病毒介导的昆虫细胞表达系统 | 第25-26页 |
| ·研究目的及意义 | 第26-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-43页 |
| ·供试药剂、试剂和试验仪器 | 第27-29页 |
| ·供试药剂 | 第27页 |
| ·化学试剂 | 第27-28页 |
| ·分子试剂 | 第28页 |
| ·试验仪器 | 第28-29页 |
| ·供试昆虫 | 第29页 |
| ·毒力测定试验 | 第29-30页 |
| ·酶抑制剂增效作用测定试验 | 第30页 |
| ·细胞色素P450酶活测定试验 | 第30-32页 |
| ·试剂配制 | 第30-31页 |
| ·酶液制备 | 第31页 |
| ·细胞色素P450酶活测定 | 第31页 |
| ·蛋白含量测定 | 第31-32页 |
| ·棉蚜体内代谢吡虫啉测定试验 | 第32页 |
| ·棉蚜细胞色素P450酶基因克隆及序列分析 | 第32-36页 |
| ·总RNA提取 | 第32-33页 |
| ·RNA纯度及浓度检测 | 第33-34页 |
| ·反转录cDNA第一链的合成 | 第34页 |
| ·引物设计及cDNA的PCR扩增 | 第34-35页 |
| ·PCR产物纯化、克隆、测序 | 第35-36页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第35页 |
| ·载体链接 | 第35页 |
| ·转化反应及扩大培养 | 第35-36页 |
| ·荧光定量PCR（qPCR） | 第36-38页 |
| ·荧光定量PCR引物设计 | 第36-37页 |
| ·荧光定量PCR扩增 | 第37页 |
| ·棉蚜细胞色素P450基因相对表达量的比较 | 第37-38页 |
| ·3’RACE扩增CYP6-like3-Ag基因全长 | 第38-39页 |
| ·总RNA的提取 | 第38页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第38页 |
| ·3’RACE引物设计 | 第38页 |
| ·3’RACE PCR扩增 | 第38-39页 |
| ·3’RACE PCR产物回收纯化、克隆、测序 | 第39页 |
| ·棉蚜CYP6CY3-Ag基因体外异源表达 | 第39-43页 |
| ·棉蚜CYP6CY3-Ag基因序列合成 | 第39页 |
| ·双酶切、连接、转化测序 | 第39页 |
| ·昆虫Sf9细胞的培养 | 第39页 |
| ·制备重组杆状病毒Bacmid DNA | 第39-40页 |
| ·提取重组杆状病毒Bacmid DNA | 第40-41页 |
| ·重组Bacmid DNA的鉴定 | 第41页 |
| ·重组病毒Bacmid DNA对昆虫细胞的转染及侵染 | 第41-42页 |
| ·SDS-PAGE监测表达蛋白 | 第42-43页 |
| ·蛋白含量测定和酶活力测定 | 第43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-59页 |
| ·山东棉区棉蚜种群对吡虫啉抗性检测 | 第43-44页 |
| ·酶抑制剂增效作用 | 第44-45页 |
| ·4种群棉蚜体内细胞色素P450酶活测定 | 第45-46页 |
| ·棉蚜代谢吡虫啉测定结果 | 第46-47页 |
| ·棉蚜细胞色素P450基因片段序列和进化分析 | 第47-52页 |
| ·棉蚜总RNA的提取及检测 | 第47页 |
| ·棉蚜细胞色素P450基因扩增（PCR）结果 | 第47-48页 |
| ·棉蚜细胞色素P450基因测序比较分析及系统进化树的构建 | 第48-52页 |
| ·荧光定量PCR（qPCR）结果 | 第52-54页 |
| ·qPCR产物特异性分析 | 第52-53页 |
| ·细胞色素P450酶CYP基因mRNA相对表达量 | 第53-54页 |
| ·3’RACE试验结果 | 第54-56页 |
| ·细胞色素P450酶CYP6家族基因体外表达结果 | 第56-59页 |
| ·pFastBac供体载体构建 | 第56-57页 |
| ·重组杆状病毒Bacmid DNA的获得 | 第57页 |
| ·SDS-PAGE检测蛋白表达 | 第57-58页 |
| ·棉蚜细胞色素P450 CYP6CY3 -Ag蛋白活性测定 | 第58页 |
| ·棉蚜细胞色素P450 CYP6CY3-Ag蛋白代谢吡虫啉试验 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-64页 |
| ·山东田间棉蚜种群对吡虫啉杀虫剂的抗药性现状 | 第59-60页 |
| ·细胞色素P450酶活升高介导的棉蚜对吡虫啉的代谢抗性 | 第60-61页 |
| ·细胞色素P450酶CYP家族基因扩增及序列分析 | 第61-62页 |
| ·细胞色素P450基因过量表达与棉蚜抗性研究 | 第62-63页 |
| ·棉蚜CYP6CY3-Ag基因体外异源表达 | 第63-64页 |
| 5 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第78页 |
