| 前言 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第1章 绪论 | 第14-22页 |
| ·淀粉酶的研究进展 | 第14-17页 |
| ·淀粉酶定义 | 第14页 |
| ·淀粉酶的底物 | 第14-15页 |
| ·淀粉酶分类 | 第15-16页 |
| ·淀粉酶的工业应用 | 第16-17页 |
| ·α-淀粉酶 | 第17-19页 |
| ·α-淀粉酶简介 | 第17页 |
| ·α-淀粉酶的催化机理 | 第17-18页 |
| ·α-淀粉酶结构域 | 第18-19页 |
| ·多功能淀粉酶 | 第19页 |
| ·酶的合理性设计 | 第19-20页 |
| ·选题背景及研究内容 | 第20-22页 |
| 第2章 多功能淀粉酶OPMA-G突变体的克隆、表达与纯化 | 第22-42页 |
| ·引言 | 第22页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·实验试剂 | 第22页 |
| ·载体及菌种 | 第22-23页 |
| ·实验仪器 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-35页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第23-24页 |
| ·截短突变体ΔOPMA-G基因的扩增 | 第24页 |
| ·点突变体OPMA-GM3和OPMA-GM4基因的扩增 | 第24-27页 |
| ·目的基因的回收 | 第27-28页 |
| ·载体的酶切回收 | 第28页 |
| ·酶切片段与酶切载体的连接 | 第28页 |
| ·氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第28-29页 |
| ·目的基因的转化 | 第29页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒 | 第29-30页 |
| ·碱裂解法大量提取质粒 | 第30-31页 |
| ·质粒DNA浓度测定—紫外吸收法 | 第31页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第31-32页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第32页 |
| ·表达菌体的超声破碎 | 第32页 |
| ·Ni~(2+)-NTA柱亲和层析纯化蛋白 | 第32-33页 |
| ·包涵体的洗涤 | 第33页 |
| ·包涵体的溶解 | 第33页 |
| ·包涵体透析复性 | 第33页 |
| ·淀粉酶活力的测定 | 第33-34页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第34-35页 |
| ·结果与讨论 | 第35-41页 |
| ·C端截短突变体ΔOPMA-G及点突变体OPMA-GM #3(V200G)、OPMA-GM4(V200K)的基因克隆 | 第35-36页 |
| ·淀粉酶截短体ΔOPMA-G及突变体OPMA-GM3、OPMA-GM4的表达 | 第36-37页 |
| ·多功能淀粉酶OPMA-G和突变体OPMA-GM3、OPMA-GM4的纯化 | 第37-38页 |
| ·ΔOPMA-G包涵体的洗涤 | 第38-39页 |
| ·包涵体的溶解 | 第39页 |
| ·包涵体的透析复性 | 第39-41页 |
| 小结 | 第41-42页 |
| 第3章 多功能淀粉酶OPMA-G及其突变体的酶学性质研究 | 第42-59页 |
| ·引言 | 第42页 |
| ·实验材料 | 第42-43页 |
| ·实验试剂 | 第42页 |
| ·实验仪器 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-45页 |
| ·淀粉酶活力测定方法 | 第43页 |
| ·酶的底物特异性、产物特异性分析 | 第43-44页 |
| ·产物生成曲线的绘制 | 第44页 |
| ·温度对酶活性的影响 | 第44页 |
| ·pH对酶活性的影响 | 第44页 |
| ·Ca~(2+)对酶活性的影响 | 第44-45页 |
| ·金属离子及EDTA对酶活性的影响 | 第45页 |
| ·动力学参数的测定 | 第45页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第45页 |
| ·非变性蛋白电泳 | 第45页 |
| ·淀粉吸附能力实验 | 第45页 |
| ·结果与讨论 | 第45-58页 |
| ·底物特异性、产物的特异性分析 | 第45-46页 |
| ·产物的定量分析 | 第46-47页 |
| ·淀粉酶催化淀粉的产物生成过程分析 | 第47-49页 |
| ·温度对酶活性的影响 | 第49-50页 |
| ·pH对酶活性的影响 | 第50页 |
| ·Ca~(2+)对酶活性的影响 | 第50-51页 |
| ·金属离子及EDTA对酶活性的影响 | 第51-52页 |
| ·淀粉酶OPMA-G及其突变体动力学参数测定 | 第52页 |
| ·多功能淀粉酶OPMA-G的C端结构域对酶寡聚化的影响 | 第52-53页 |
| ·多功能淀粉酶OPMA-G突变体对底物吸附的影响 | 第53-54页 |
| ·多功能淀粉酶OPMA-G的C端结构域对产物特异性的影响 | 第54-55页 |
| ·OPMA-G中V200位点对产物体系的影响 | 第55-58页 |
| 小结 | 第58-59页 |
| 第4章 结论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
