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多功能淀粉酶OPMA-G的结构与功能研究

前言第1-5页
摘要第5-7页
Abstract第7-14页
第1章 绪论第14-22页
   ·淀粉酶的研究进展第14-17页
     ·淀粉酶定义第14页
     ·淀粉酶的底物第14-15页
     ·淀粉酶分类第15-16页
     ·淀粉酶的工业应用第16-17页
   ·α-淀粉酶第17-19页
     ·α-淀粉酶简介第17页
     ·α-淀粉酶的催化机理第17-18页
     ·α-淀粉酶结构域第18-19页
     ·多功能淀粉酶第19页
   ·酶的合理性设计第19-20页
   ·选题背景及研究内容第20-22页
第2章 多功能淀粉酶OPMA-G突变体的克隆、表达与纯化第22-42页
   ·引言第22页
   ·实验材料第22-23页
     ·实验试剂第22页
     ·载体及菌种第22-23页
     ·实验仪器第23页
   ·实验方法第23-35页
     ·琼脂糖凝胶电泳第23-24页
     ·截短突变体ΔOPMA-G基因的扩增第24页
     ·点突变体OPMA-GM3和OPMA-GM4基因的扩增第24-27页
     ·目的基因的回收第27-28页
     ·载体的酶切回收第28页
     ·酶切片段与酶切载体的连接第28页
     ·氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞第28-29页
     ·目的基因的转化第29页
     ·碱裂解法小量提取质粒第29-30页
     ·碱裂解法大量提取质粒第30-31页
     ·质粒DNA浓度测定—紫外吸收法第31页
     ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳第31-32页
     ·目的蛋白的诱导表达第32页
     ·表达菌体的超声破碎第32页
     ·Ni~(2+)-NTA柱亲和层析纯化蛋白第32-33页
     ·包涵体的洗涤第33页
     ·包涵体的溶解第33页
     ·包涵体透析复性第33页
     ·淀粉酶活力的测定第33-34页
     ·蛋白浓度的测定第34-35页
   ·结果与讨论第35-41页
     ·C端截短突变体ΔOPMA-G及点突变体OPMA-GM #3(V200G)、OPMA-GM4(V200K)的基因克隆第35-36页
     ·淀粉酶截短体ΔOPMA-G及突变体OPMA-GM3、OPMA-GM4的表达第36-37页
     ·多功能淀粉酶OPMA-G和突变体OPMA-GM3、OPMA-GM4的纯化第37-38页
     ·ΔOPMA-G包涵体的洗涤第38-39页
     ·包涵体的溶解第39页
     ·包涵体的透析复性第39-41页
 小结第41-42页
第3章 多功能淀粉酶OPMA-G及其突变体的酶学性质研究第42-59页
   ·引言第42页
   ·实验材料第42-43页
     ·实验试剂第42页
     ·实验仪器第42-43页
   ·实验方法第43-45页
     ·淀粉酶活力测定方法第43页
     ·酶的底物特异性、产物特异性分析第43-44页
     ·产物生成曲线的绘制第44页
     ·温度对酶活性的影响第44页
     ·pH对酶活性的影响第44页
     ·Ca~(2+)对酶活性的影响第44-45页
     ·金属离子及EDTA对酶活性的影响第45页
     ·动力学参数的测定第45页
     ·蛋白浓度的测定第45页
     ·非变性蛋白电泳第45页
     ·淀粉吸附能力实验第45页
   ·结果与讨论第45-58页
     ·底物特异性、产物的特异性分析第45-46页
     ·产物的定量分析第46-47页
     ·淀粉酶催化淀粉的产物生成过程分析第47-49页
     ·温度对酶活性的影响第49-50页
     ·pH对酶活性的影响第50页
     ·Ca~(2+)对酶活性的影响第50-51页
     ·金属离子及EDTA对酶活性的影响第51-52页
     ·淀粉酶OPMA-G及其突变体动力学参数测定第52页
     ·多功能淀粉酶OPMA-G的C端结构域对酶寡聚化的影响第52-53页
     ·多功能淀粉酶OPMA-G突变体对底物吸附的影响第53-54页
     ·多功能淀粉酶OPMA-G的C端结构域对产物特异性的影响第54-55页
     ·OPMA-G中V200位点对产物体系的影响第55-58页
 小结第58-59页
第4章 结论第59-61页
参考文献第61-66页
致谢第66页

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