| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 縮略词 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-18页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌概述 | 第11-12页 |
| ·病原学 | 第11页 |
| ·流行病学 | 第11-12页 |
| ·猪胸膜肺炎放线杆菌毒力因子 | 第12-15页 |
| ·参与黏附定植的毒力因子 | 第12-14页 |
| ·参与获取营养元素的毒力因子 | 第14页 |
| ·参与抵抗宿主免疫反应引起宿主损伤的毒力因子 | 第14-15页 |
| ·参与持续感染的毒力因子 | 第15页 |
| ·双组份调控系统 | 第15-18页 |
| 2 研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 3 材料与方法 | 第19-32页 |
| ·实验材料 | 第19-23页 |
| ·菌种、质粒和培养条件 | 第19-20页 |
| ·工具酶和试剂 | 第20-21页 |
| ·培养基以及抗生素的配制 | 第21-22页 |
| ·引物表 | 第22-23页 |
| ·分子生物学水平上的操作 | 第23-26页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌基因组的提取 | 第23页 |
| ·PCR产物或酶切产物的回收与纯化 | 第23页 |
| ·连接产物的转化 | 第23页 |
| ·质粒的小量制备 | 第23-24页 |
| ·质粒的大量制备(碱裂解法) | 第24-25页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第25页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌电转化 | 第25-26页 |
| ·突变株△phoB/R与互补菌株C△phoB/R的构建 | 第26-28页 |
| ·SLW01菌株中phoB/R基因上下游同源臂的扩增与鉴定 | 第26-27页 |
| ·重组转移质粒pEM-phoBR的构建 | 第27页 |
| ·突变株△phoB/R的筛选 | 第27页 |
| ·△phoB/R互补菌株CAphoB/R的筛选 | 第27-28页 |
| ·突变株△phoB/R生物学特性研究 | 第28页 |
| ·双基因缺失突变株遗传稳定性分析 | 第28页 |
| ·双基因缺失突变株△phoB/R与互补菌株C△phoB/R生长特性分析 | 第28页 |
| ·小鼠致病力分析 | 第28-29页 |
| ·小鼠LD_(50)实验 | 第28页 |
| ·小鼠存活率实验 | 第28页 |
| ·组织存活率实验 | 第28-29页 |
| ·细胞水平上的操作 | 第29页 |
| ·中性粒细胞介导的杀伤实验 | 第29页 |
| ·RNA水平的操作 | 第29-32页 |
| ·RNA的抽提 | 第29-30页 |
| ·RT-PCR | 第30页 |
| ·Agilent表达谱芯片 | 第30页 |
| ·qRT-PCR验证芯片结果及分析 | 第30-32页 |
| 4 结果与分析 | 第32-44页 |
| ·JL03中phoB、phoR基因相关生物信息学分析 | 第32页 |
| ·phoB、phoR基因一般特性 | 第32页 |
| ·突变株△phoBR的构建及鉴定 | 第32-34页 |
| ·基因phoB/R上下游同源臂的扩增 | 第32-33页 |
| ·重组自杀性质粒pEM-phoB/R的构建与鉴定 | 第33页 |
| ·突变株△phoBR的筛选 | 第33-34页 |
| ·互补菌株C△phoB/R的构建及鉴定 | 第34-36页 |
| ·突变株△phoB/R的遗传稳定性分析 | 第36页 |
| ·在正常培养条件下,△phoB/R生物学特性研究 | 第36-37页 |
| ·正常培养条件下,Agilent基因表达谱芯片筛选差异表达基因 | 第37页 |
| ·在磷限制培养条件下,△phoB/R生物学特性研究 | 第37-38页 |
| ·突变株△phoBR毒力分析 | 第38-40页 |
| ·小鼠LD_(50)测定 | 第38页 |
| ·小鼠存活率实验 | 第38-39页 |
| ·小鼠组织载菌量实验 | 第39-40页 |
| ·猪外周血中性粒细胞介导杀伤试验 | 第40页 |
| ·磷限制培养条件下,Agilent表达谱芯片筛选差异表达基因 | 第40-41页 |
| ·磷限制培养条件下,差异表达基因COG功能聚类分析 | 第41-42页 |
| ·芯片结果分析 | 第42-43页 |
| ·荧光定量PCR | 第43-44页 |
| 5 讨论 | 第44-47页 |
| ·PhoBR转录调控子的选择 | 第44页 |
| ·突变株△phoBR与互补菌株C△phoBR的构建 | 第44页 |
| ·突变株△phoBR毒力分析 | 第44-45页 |
| ·基因芯片RNA提取条件的选择 | 第45页 |
| ·芯片结果分析 | 第45-46页 |
| ·后续工作展望 | 第46-47页 |
| 6 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
