| 摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-17页 |
| 缩略词 | 第17-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-30页 |
| ·无融合生殖分子机理研究进展及现状 | 第19-22页 |
| ·无融合生殖的遗传基础 | 第19-20页 |
| ·无融合生殖的分子机理 | 第20-22页 |
| ·苹果属无融合生殖研究进展 | 第22-24页 |
| ·苹果属无融合生殖种质资源 | 第22-23页 |
| ·平邑甜茶无融合生殖研究进展 | 第23-24页 |
| ·无融合生殖相关基因研究进展 | 第24-26页 |
| ·SERK基因研究现状 | 第26-28页 |
| ·本研究的目的意义 | 第28-30页 |
| 第二章 苹果属无融合生殖相关的SERK基因片段的分离 | 第30-42页 |
| ·材料与方法 | 第30-31页 |
| ·植物材料 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30-31页 |
| ·试验方法 | 第31-33页 |
| ·平邑甜茶和杂种后代33#基因组DNA的提取 | 第31页 |
| ·基因组DNA的质量和纯度检测 | 第31页 |
| ·引物设计 | 第31页 |
| ·PCR反应体系 | 第31-32页 |
| ·目的片段的回收 | 第32页 |
| ·PCR扩增及克隆载体的连接 | 第32页 |
| ·重组质粒的大肠杆菌转化 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第33页 |
| ·核苷酸序列测定 | 第33页 |
| ·序列比对与分析 | 第33页 |
| ·结果与分析 | 第33-40页 |
| ·平邑甜茶和杂种后代33#株系DNA的质量和完整性检测 | 第33-34页 |
| ·苹果属SERK同源基因家族的克隆 | 第34-38页 |
| ·SERK基因特异片段序列分析 | 第38-39页 |
| ·SERKs基因片段内含子分析 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| ·基因组DNA的提取方法的比较 | 第40页 |
| ·SERK类基因的类型与结构 | 第40-41页 |
| ·小结 | 第41-42页 |
| 第三章 苹果属SERK基因全序列的获得 | 第42-67页 |
| ·材料与方法 | 第42-44页 |
| ·植物材料 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·平邑甜茶和杂种后代33#基因组RNA的制备 | 第42-43页 |
| ·基因组RNA的质量和纯度检测 | 第43页 |
| ·引物设计 | 第43页 |
| ·RT-PCR | 第43页 |
| ·SERK cDNA和DNA全长的获得 | 第43-44页 |
| ·目的片段的回收 | 第44页 |
| ·PCR扩增及克隆载体的连接 | 第44页 |
| ·重组质粒大肠杆菌转化 | 第44页 |
| ·重组载体导入大肠杆菌的鉴定 | 第44页 |
| ·核苷酸序列测定 | 第44页 |
| ·序列比对与分析 | 第44页 |
| ·结果与分析 | 第44-63页 |
| ·RNA质量检测 | 第44-45页 |
| ·cDNA全长的克隆 | 第45-46页 |
| ·MhSERK1、MhdSERK1和MhSERK4、MhdSERK4编码蛋白聚类及序列特征分析 | 第46-59页 |
| ·MhSERK1和MhdSERK1基因DNA全长序列分析 | 第59-60页 |
| ·MhSERK1和MhdSERK1编码蛋白的结构分析 | 第60-63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| ·SERK类基因全序列的获得方法 | 第63页 |
| ·SERK基因及蛋白结构特征 | 第63-65页 |
| ·小结 | 第65-67页 |
| 第四章 苹果属SERK基因的表达分析 | 第67-76页 |
| ·材料与方法 | 第67页 |
| ·植物材料 | 第67页 |
| ·试剂 | 第67页 |
| ·方法 | 第67-69页 |
| ·总RNA提取和cDNA的合成 | 第67页 |
| ·引物设计 | 第67-68页 |
| ·RT-PCR | 第68页 |
| ·实时定量PCR | 第68-69页 |
| ·结果与分析 | 第69-73页 |
| ·总RNA的质量 | 第69-70页 |
| ·SERK基因家族在平邑甜茶和杂种后代33#不同器官组织中的表达 | 第70-71页 |
| ·SERK1在平邑甜茶和杂种后代33#不同花期子房中的表达 | 第71-72页 |
| ·SERK基因家族在平邑甜茶和杂种后代花后期的表达 | 第72-73页 |
| ·讨论 | 第73-74页 |
| ·小结 | 第74-76页 |
| 第五章 苹果属SERK基因的植物表达载体构建 | 第76-84页 |
| ·试验材料 | 第76-77页 |
| ·菌株和质粒 | 第76页 |
| ·试剂 | 第76页 |
| ·培养基配方 | 第76-77页 |
| ·试验方法 | 第77-81页 |
| ·PCR扩增引物序列 | 第77页 |
| ·pBI121-MhSERKs载体构建 | 第77-78页 |
| ·目的基因的获得 | 第78-79页 |
| ·PGM-MhSERKs和pBI121质粒的提取 | 第79页 |
| ·pBI121质粒和MhSERKs基因的双酶切 | 第79页 |
| ·MhSERKs-pBI121和MhdSERKs-pBI121载体构建 | 第79-80页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第80页 |
| ·质粒DNA农杆菌感受态转化与PCR检测 | 第80-81页 |
| ·结果与分析 | 第81-82页 |
| ·pBI121-MhSERK1和pBI121-MhdSERK1载体构建 | 第81页 |
| ·pBI121-MhSERK4和pBI121-MhdSERK4载体构建 | 第81-82页 |
| ·讨论 | 第82-83页 |
| ·小结 | 第83-84页 |
| 第六章 苹果属MhSERK1和MhdSERK1基因遗传转化的研究 | 第84-95页 |
| ·试验材料 | 第84页 |
| ·材料 | 第84页 |
| ·主要试剂 | 第84页 |
| ·试验方法 | 第84-86页 |
| ·Micro-Tom番茄无菌苗和烟草组培苗的获得 | 第84页 |
| ·培养基配方 | 第84-85页 |
| ·菌液制备 | 第85页 |
| ·外植体的选取和侵染 | 第85页 |
| ·抗性芽的筛选 | 第85-86页 |
| ·转化苗的移栽 | 第86页 |
| ·转化株的DNA提取 | 第86页 |
| ·转化植株PCR鉴定 | 第86页 |
| ·结果与分析 | 第86-91页 |
| ·农杆菌介导的Micro-Tom番茄的遗传转化 | 第86-88页 |
| ·农杆菌介导的烟草遗传转化及PCR检测 | 第88-91页 |
| ·讨论 | 第91-93页 |
| ·农杆菌介导的Micro-Tom番茄的遗传转化 | 第91-92页 |
| ·农杆菌介导烟草的遗传转化 | 第92-93页 |
| ·转基因抗性植株的检测方法 | 第93页 |
| ·小结 | 第93-95页 |
| 第七章 结论与创新点 | 第95-97页 |
| ·结论 | 第95页 |
| ·创新点 | 第95-96页 |
| ·存在问题及下一步研究设想 | 第96-97页 |
| ·本项研究存在的不足 | 第96页 |
| ·下一步研究设想 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-109页 |
| 附录 | 第109-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
| 攻读博士期间发表论文 | 第116-117页 |
