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锌指蛋白KRAB结构域入核及ZNF300在K562细胞诱导分化中的功能探索

论文创新点第1-6页
摘要第6-8页
Abstract第8-11页
中英文缩略对照表第11-16页
第一章 锌指蛋白概述第16-27页
   ·引言第16-17页
   ·锌指蛋白的发现第17-18页
   ·锌指蛋白简介第18-19页
   ·C2H2型锌指蛋白第19-25页
     ·C2H2型锌指基序的结构及其DNA结合活性第19-21页
     ·C2H2型锌指蛋白的分类第21-23页
     ·C2H2型锌指蛋白的生化功能第23-25页
   ·C2H2型锌指蛋白的应用第25-27页
第二章 KRAB型锌指蛋白概述及ZNF268与ZNF300研究进展第27-60页
   ·引言第27-28页
   ·KRAB结构域简介第28-31页
     ·KRAB结构域的一般构成第28-29页
     ·KRAB结构域的转录抑制功能第29-30页
     ·KRAB结构域转录抑制功能的机制第30-31页
   ·KRAB型锌指蛋白的核定位第31-40页
     ·大分子物质的核运输第31-39页
     ·KRAB锌指蛋白的锌指结构域发挥核定位功能第39-40页
   ·KRAB型锌指蛋白的功能第40-50页
     ·KRAB锌指蛋白与器官发育第40-41页
     ·KRAB锌指蛋白与造血分化第41-49页
     ·KRAB锌指蛋白与疾病第49-50页
   ·ZNF268的研究进展第50-54页
     ·ZNF268基因的结构特点第50-52页
     ·ZNF268基因的功能第52-54页
   ·ZNF300的研究进展第54-60页
     ·ZNF300的基因结构第54-55页
     ·ZNF300基因的表达谱第55-56页
     ·ZNF300基因下游靶标基因的核心结合序列第56页
     ·ZNF300基因的功能第56-60页
第三章 锌指蛋白KRAB结构域入核功能研究第60-99页
 摘要第60页
   ·引言第60-62页
   ·实验材料与仪器第62-66页
     ·实验材料第62-65页
     ·实验仪器第65-66页
   ·实验方法第66-82页
     ·细胞总RNA的提取第66页
     ·反转录cDNA第一链的合成第66-67页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备第67页
     ·载体构建第67-74页
     ·细胞培养第74-75页
     ·细胞转染第75-76页
     ·Confocal实验第76-77页
     ·GST pull-down实验第77-78页
     ·Western Blot实验第78-81页
     ·Co-IP实验第81-82页
   ·实验结果第82-97页
     ·KRAB结构域入核功能的普遍性第82-87页
     ·KRAB结构域入核功能的关键氨基酸位点第87-91页
     ·KRAB结构入核机制研究第91-97页
   ·讨论第97-99页
第四章 ZNF300促进K562细胞诱导分化的功能研究第99-135页
 摘要第99页
   ·引言第99-100页
   ·实验材料与仪器第100-104页
     ·实验材料第100-104页
     ·实验仪器第104页
   ·实验方法第104-115页
     ·悬浮细胞培养第104-105页
     ·细胞计数第105页
     ·悬浮细胞诱导分化第105页
     ·流式细胞仪检测细胞表面分子的比例第105-106页
     ·瑞氏-吉姆萨染色第106页
     ·实时定量RT-PCR第106-108页
     ·Western Blot第108页
     ·Benzidine染色第108页
     ·下调ZNF300表达的shRNA载体构建第108-112页
     ·慢病毒颗粒的包装第112-113页
     ·慢病毒颗粒感染细胞及筛选稳转细胞系第113页
     ·嘌呤霉素杀灭曲线的确定第113-114页
     ·悬浮细胞电转筛选稳转细胞系第114页
     ·DAPI染色检测细胞周期变化第114-115页
   ·实验结果第115-133页
     ·ZNF300基因在K562细胞向巨核系诱导分化过程中的变化第115-118页
     ·ZNF300基因在K562细胞向红系分化过程中的表达变化第118-121页
     ·特异性下调ZNF300基因表达的shRNA慢病毒载体构建第121-124页
     ·下调ZNF300表达的稳转细胞系的构建第124-126页
     ·ZNF300基因的表达下调之后对巨核系分化的影响第126-128页
     ·ZNF300基因的表达下调之后对红系分化的影响第128-130页
     ·ZNF300基因的表达下调之后对细胞增殖的影响第130-131页
     ·ZNF300基因的表达下调对细胞周期的影响第131-133页
   ·讨论第133-135页
第五章 小鼠胚胎发育全基因组表达谱芯片分析第135-152页
 摘要第135页
   ·引言第135-137页
   ·实验材料与方法第137-141页
     ·实验材料第137-138页
     ·实验方法第138-141页
   ·实验结果与数据分析第141-150页
     ·小鼠胚胎发育过程中基因表达概况第141-143页
     ·差异基因的表达模式和功能分析第143-149页
     ·基因使用效率的不同反应物种进化上的差异第149-150页
   ·讨论第150-152页
研究总结与展望第152-155页
参考文献第155-178页
博士研究生期间发表及待发表的论文第178-180页
致谢第180-182页

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