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基于微针给药主动靶向APCs的脂质体经皮疫苗递送系统研究

摘要第1-11页
ABSTRACT第11-15页
英文缩略词第15-17页
前言第17-21页
第一部分:载 OVA 抗原的 DCs 靶向免疫脂质体的制备及表征第21-34页
 1 仪器与材料第22-23页
   ·仪器第22-23页
   ·材料与试剂第23页
   ·细胞与动物第23页
 2 实验方法第23-27页
   ·载 OVA 抗原脂质体的制备及表征第23-24页
     ·载 OVA 抗原脂质体的制备第23-24页
     ·载 OVA 抗原脂质体的粒径和 Zeta 电位测定第24页
   ·CD11c 单克隆抗体修饰的免疫脂质体的制备及表征第24-27页
     ·免疫脂质体的制备及纯化第24-25页
     ·免疫脂质体的粒径和 Zeta 电位测定第25页
     ·别藻青蛋白标记的 CD11c 单克隆抗体浓度标准曲线第25页
     ·免疫脂质体的抗体连接率测定第25页
     ·FITC 荧光标记的 OVA 溶液标准曲线的绘制第25页
     ·免疫脂质体包封率的测定第25-26页
     ·免疫脂质体形态的透射电镜观察第26页
     ·裸鼠离体皮肤的制备第26页
     ·皮肤表面免疫脂质体染色后激光共聚焦观察第26页
     ·小鼠骨髓来源的树突状细胞的培养第26页
     ·免疫脂质体表面连接的单克隆抗体活性的测定第26-27页
 3 结果第27-32页
   ·免疫脂质体的 Sepharose CL 4B 层析柱纯化第27页
   ·制备的脂质体及免疫脂质体的外观、粒径及 Zeta 电位第27-29页
   ·APC 标记的 CD11c 单抗标准曲线的绘制及脂质体连接率测定第29页
   ·FITC OVA 溶液标准曲线的绘制和免疫脂质体包封率的测定第29-32页
 4 讨论第32-33页
 5 小结第33-34页
第二部分:基于微针给药的免疫脂质体经皮促透效果及递送机理研究第34-50页
 1 仪器与材料第35-36页
   ·仪器第35-36页
   ·材料与试剂第36页
   ·细胞与动物第36页
 2 实验方法第36-40页
   ·离体皮肤的制备及预处理第36页
   ·微针穿刺实验方法第36页
   ·微针处理对免疫脂质体包载抗原的经皮促透作用第36-37页
   ·微针处理后透皮实验中皮肤内 OVA 抗原含量的测定第37页
   ·微针处理对免疫脂质体的皮内促透效果的激光共聚焦显微镜观察第37-38页
   ·微针对离体皮肤穿刺效果的形态观察第38页
     ·台盼蓝染色实验第38页
     ·免疫组化染色实验第38页
     ·微针处理后皮肤表面的扫描电镜观察第38页
   ·微针处理对皮肤透过功能的影响:经皮水份流失(TEWL)值的测定第38-39页
     ·在体裸鼠和人体皮肤微针穿刺后 TEWL 值的测定第38-39页
     ·离体裸鼠皮肤微针穿刺后 TEWL 值的测定第39页
   ·微针穿刺对皮肤刺激反应评价第39-40页
 3 结果第40-47页
   ·微针阵列及进针装置第40页
   ·微针阵列处理对免疫脂质体包载 OVA 抗原的经皮促透作用第40-42页
   ·微针处理经皮促透作用的激光共聚焦显微镜观察第42-43页
   ·微针对离体皮肤穿刺效果的形态观察第43-46页
     ·微针对裸鼠离体皮肤穿刺效果的台盼蓝染色实验观察第43-44页
     ·微针对离体皮肤穿刺效果的免疫组化染色观察第44-45页
     ·微针对离体皮肤穿刺效果的扫描电镜观察第45-46页
   ·微针穿刺后皮肤的透过功能评价第46-47页
   ·微针穿刺的皮肤刺激反应评价第47页
 4 讨论第47-48页
 5 小结第48-50页
第三部分:免疫脂质体对 DCs 的主动靶向作用及对其功能的影响研究第50-63页
 1 仪器与材料第51-52页
   ·仪器第51-52页
   ·材料与试剂第52页
   ·细胞与动物第52页
 2 实验方法第52-55页
   ·小鼠骨髓来源的树突状细胞(BMDCs)的培养第52页
   ·小鼠耳部皮肤来源的树突状细胞(dDCs)的培养第52-53页
   ·免疫脂质体体外 DCs 靶向效率测定第53页
   ·免疫脂质体体外 DCs 靶向性的激光共聚焦显微镜观察第53页
   ·免疫脂质体对 DCs 表面成熟相关分子表达的影响第53页
   ·免疫脂质体刺激 DCs 分泌细胞因子 TNF α水平的检测第53-54页
   ·DCs 抗原摄取功能实验第54页
   ·DCs 对双荧光免疫脂质体摄取的动力学观察第54页
   ·免疫脂质体微针透皮给药第54页
   ·DCs 摄取透皮抗原后向淋巴结和脾脏迁移情况观察第54-55页
 3 结果第55-60页
   ·免疫脂质体体外具有 DCs 特异靶向性第55-56页
   ·免疫脂质体体外 DCs 靶向性的激光共聚焦显微镜观察第56-57页
   ·免疫脂质体可促进 DCs 的表型成熟第57-58页
   ·免疫脂质体可促进 DCs 分泌前炎性细胞因子 TNF α第58页
   ·免疫脂质体可促进 DCs 对免疫脂质体包载抗原的摄取第58-59页
   ·DCs 可将摄取的抗原有效转运至引流淋巴结和脾脏第59-60页
 4 讨论第60-62页
 5 小结第62-63页
第四部分:载 OVA 免疫脂质体基于微针给药经皮免疫的体内效果评价第63-77页
 1 仪器与材料第63-65页
   ·仪器第63-64页
   ·材料与试剂第64页
   ·细胞与动物第64-65页
 2 实验方法第65-68页
   ·小鼠的免疫第65-66页
   ·免疫小鼠血清中 OVA 特异性抗体滴度的测定第66页
   ·小鼠荷瘤及观察第66页
   ·免疫小鼠脾细胞的制备第66-67页
   ·T 细胞增殖实验第67页
   ·免疫小鼠脾细胞抗原再刺激分泌 IL 2、IFN γ水平的检测第67页
   ·CTL 杀伤试验第67-68页
 3 结果第68-75页
   ·免疫脂质体经皮免疫对 E.G7 OVA 肿瘤生长的抑制作用第68-69页
   ·免疫脂质体经皮免疫延长了荷瘤小鼠的生存期第69-70页
   ·免疫脂质体经皮免疫产生了有效的体液免疫应答第70-71页
   ·免疫脂质体经皮免疫产生了 OVA 抗原特异性的 T 细胞增殖第71-72页
   ·免疫脂质体经皮免疫产生的免疫应答是 Th1 偏向的第72-74页
   ·免疫脂质体经皮免疫诱导小鼠产生了抗原特异性 CTL第74-75页
 4 讨论第75页
 5 小结第75-77页
全文总结第77-79页
参考文献第79-84页
综述第84-106页
 参考文献第99-106页
发表论文及参加的科研工作第106-107页
致谢第107页

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