| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略语 | 第8-9页 |
| 目录 | 第9-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-23页 |
| ·SOD 研究概述 | 第14-16页 |
| ·SOD 的基本概念 | 第14页 |
| ·SOD 的类型和分布 | 第14-15页 |
| ·SOD 的结构和性质 | 第15-16页 |
| ·SOD 在各个领域的应用 | 第16页 |
| ·耐热蛋白的研究进展及意义 | 第16-17页 |
| ·蛋白质结晶技术的研究进展 | 第17-19页 |
| ·蛋白质结晶技术的历史 | 第17-18页 |
| ·蛋白质晶体的形成过程 | 第18页 |
| ·蛋白质形成结晶的方法 | 第18页 |
| ·影响蛋白质结晶的因素 | 第18-19页 |
| ·实验设计方案 | 第19-23页 |
| ·研究目的和意义 | 第19页 |
| ·研究内容 | 第19-21页 |
| ·实验流程图 | 第21-23页 |
| 第二章 生物信息学分析 | 第23-27页 |
| ·序列和生物信息学工具 | 第23页 |
| ·序列 | 第23页 |
| ·生物信息学工具 | 第23页 |
| ·结果 | 第23-26页 |
| ·耐高温 FeSOD 的基因序列 | 第23-24页 |
| ·耐高温 FeSOD 蛋白的疏水性分析 | 第24-25页 |
| ·耐高温 FeSOD 蛋白的跨膜区分析 | 第25页 |
| ·耐高温 FeSOD 蛋白的信号肽分析 | 第25-26页 |
| ·讨论 | 第26-27页 |
| 第三章 耐高温 FeSOD 基因的克隆、原核表达以及重组产物的纯化 | 第27-40页 |
| ·材料和试剂 | 第27页 |
| ·材料 | 第27页 |
| ·试剂 | 第27页 |
| ·试剂配置 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-33页 |
| ·重组质粒的构建 | 第27-28页 |
| ·FeSOD 基因的克隆 | 第28-30页 |
| ·融合蛋白的表达与纯化 | 第30-31页 |
| ·融合蛋白质谱分析 | 第31页 |
| ·BCA 法测定蛋白的浓度 | 第31-32页 |
| ·DSC 测定耐高温 FeSOD 变性温度[50] | 第32页 |
| ·酶活测定 | 第32-33页 |
| ·结果 | 第33-39页 |
| ·耐高温 FeSOD 基因的克隆结果 | 第33页 |
| ·pET-28a-FeSOD 重组质粒的 PCR 和双酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第34页 |
| ·融合蛋白的 Western blotting 鉴定 | 第34-35页 |
| ·融合蛋白的纯化结果 | 第35-37页 |
| ·质谱鉴定 | 第37页 |
| ·DCS 测定耐高温 FeSOD 的变性温度 | 第37-38页 |
| ·酶活测定结果 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| 第四章 耐高温 FeSOD 的结晶及结构解析 | 第40-51页 |
| ·材料和试剂 | 第40页 |
| ·材料和仪器 | 第40页 |
| ·试剂配制 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-42页 |
| ·蛋白样品晶体培养前的处理 | 第40-41页 |
| ·蛋白晶体的培养 | 第41页 |
| ·蛋白晶体的观测 | 第41-42页 |
| ·结果 | 第42-50页 |
| ·耐高温 FeSOD 的晶体生长结果 | 第42-43页 |
| ·耐高温 FeSOD 晶体的衍射结果 | 第43页 |
| ·耐高温 FeSOD 晶体的结构解析结果 | 第43-46页 |
| ·耐高温 FeSOD 晶体的质谱鉴定 | 第46-50页 |
| ·讨论 | 第50-51页 |
| 第五章 耐高温 FeSOD 基因片段的克隆、表达纯化及结晶 | 第51-59页 |
| ·材料和试剂 | 第51页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·试剂 | 第51页 |
| ·试剂配制 | 第51页 |
| ·方法 | 第51-54页 |
| ·重组质粒的构建 | 第51页 |
| ·FeSOD I 基因的克隆 | 第51-53页 |
| ·融合蛋白的表达与纯化 | 第53页 |
| ·FeSOD I 蛋白的酶活性测定 | 第53页 |
| ·FeSOD I 蛋白结晶条件筛选 | 第53-54页 |
| ·结果 | 第54-58页 |
| ·PCR 扩增目的基因片段 | 第54页 |
| ·重组质粒 pET-28a-FeSOD I 的 PCR 和双酶切鉴定 | 第54-55页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第55页 |
| ·融合蛋白的 Western blotting 鉴定 | 第55-56页 |
| ·融合蛋白的纯化结果 | 第56-57页 |
| ·FeSOD I 蛋白的酶活性测定结果 | 第57页 |
| ·FeSOD I 蛋白结晶筛选结果 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| 第六章 耐高温 FeSOD 耐热机制的研究 | 第59-65页 |
| ·材料和试剂 | 第59页 |
| ·方法 | 第59-60页 |
| ·耐高温 FeSOD 与耐高温 MnSOD 高级结构比对分析 | 第59页 |
| ·耐高温 FeSOD 与常温 FeSOD 高级结构比对分析 | 第59页 |
| ·耐高温 SOD 与常温 FeSOD 高级结构差异区域的氨基酸序列分析 | 第59-60页 |
| ·结果 | 第60-64页 |
| ·耐高温 FeSOD 与耐高温 MnSOD 高级结构叠合分析结果 | 第60-62页 |
| ·耐高温 FeSOD 与常温 FeSOD 高级结构叠合分析结果 | 第62-63页 |
| ·耐高温 SOD 与常温 FeSOD 高级结构差异区域的氨基酸序列分析结果 | 第63-64页 |
| ·讨论 | 第64-65页 |
| 第七章 耐高温 FeSOD 定点突变研究其耐热性的变化 | 第65-73页 |
| ·材料和试剂 | 第65页 |
| ·方法 | 第65-69页 |
| ·重组质粒的构建 | 第65页 |
| ·FeSODⅡ基因的克隆 | 第65-68页 |
| ·FeSODⅡ重组蛋白的表达与纯化 | 第68页 |
| ·DSC 测定 FeSODⅡ蛋白的变性温度 | 第68页 |
| ·FeSODⅡ重组蛋白酶活性的测定 | 第68-69页 |
| ·结果 | 第69-72页 |
| ·PCR 扩增目的基因片段 | 第69页 |
| ·重组质粒 pET-28a-FeSODⅡ的 PCR 和双酶切鉴定 | 第69-70页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第70页 |
| ·重组蛋白的纯化结果 | 第70-71页 |
| ·DSC 测定 FeSODⅡ蛋白的变性温度 | 第71页 |
| ·酶活性测定结果 | 第71-72页 |
| ·讨论 | 第72-73页 |
| 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
