| 摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-17页 |
| 缩略词表及其英汉对照 | 第17-18页 |
| 上篇 文献综述 | 第18-65页 |
| 第一章 miRNA——调控功能的非编码RNA | 第19-45页 |
| 1 miRNA的发现 | 第19页 |
| 2 miRNA的生物合成 | 第19-24页 |
| ·miRNA基因的转录与转录初产物的剪接 | 第20页 |
| ·miRNA的加工与运输 | 第20-22页 |
| ·miRNA的成熟及功能的行使 | 第22页 |
| ·植物miRNA的成熟过程 | 第22-23页 |
| ·植物miRNA功能关键蛋白 | 第23-24页 |
| 3 miRNA的特征描述 | 第24-29页 |
| ·miRNA与siRNA的异同 | 第25-27页 |
| ·植物和动物miRNA的比较 | 第27-28页 |
| ·miRNA的命名及miRNA数据库 | 第28-29页 |
| 4 miRNA的起源与进化 | 第29-30页 |
| 5 miRNA的作用机制 | 第30-31页 |
| ·miRNA指导靶mRNA的切割 | 第30页 |
| ·miRNA抑制靶标mRNA的翻译 | 第30-31页 |
| ·甲基化抑制靶基因的转录 | 第31页 |
| 6 miRNA在植物中的调节作用 | 第31-37页 |
| ·miRNA的自我调控 | 第31-32页 |
| ·miRNA与植物器官发育 | 第32页 |
| ·miRNA与植物激素信号 | 第32-33页 |
| ·miRNA与环境胁迫 | 第33-36页 |
| ·miRNA与植物免疫 | 第36页 |
| ·miRNA与ta-siRNA | 第36-37页 |
| 7 miRNA相关的研究技术 | 第37-43页 |
| ·miRNA的分离方法 | 第37-39页 |
| ·miRNA的试验验证方法 | 第39-42页 |
| ·靶基因预测及验证 | 第42-43页 |
| 8 miRNA的功能验证 | 第43-45页 |
| ·miRNA过表达 | 第43页 |
| ·Target mimicry | 第43页 |
| ·Artificial miRNA | 第43-45页 |
| 第二章 大豆抗疫霉根腐病研究进展 | 第45-51页 |
| 1 大豆疫霉的危害 | 第45页 |
| 2 大豆疫霉根腐病抗源筛选 | 第45-46页 |
| 3 大豆疫霉根腐病抗性的遗传分析及基因定位 | 第46-47页 |
| ·大豆对大豆疫霉根腐病抗性的遗传分析 | 第46页 |
| ·大豆对大豆疫霉根腐病抗性基因/QTL的定位 | 第46-47页 |
| 4 大豆疫霉根腐病抗性机制的研究 | 第47-50页 |
| ·组织结构抗性 | 第47-48页 |
| ·生理生化抗性 | 第48-50页 |
| 5 大豆疫霉根腐病抗性相关基因的研究 | 第50-51页 |
| ·表达序列标签在大豆疫霉根腐病抗性相关基因研究中的应用 | 第50页 |
| ·基因芯片在大豆疫霉根腐病抗性相关基因研究中的应用 | 第50页 |
| ·双向电泳技术在大豆疫霉根腐病相关蛋白研究中的应用 | 第50-51页 |
| 第三章 小分子RNA与植物免疫 | 第51-63页 |
| 1 miRNA在PAMP触发的细菌抗性中的作用 | 第51-54页 |
| 2 内源性的siRNA在效应分子触发的小种专化抗病性中的作用 | 第54-55页 |
| 3 植物与其它病原互作时,内源性小分子RNA的作用 | 第55-57页 |
| ·植物和昆虫互作中小分子RNA的研究 | 第55-56页 |
| ·植物和线虫互作中小分子RNA的研究 | 第56页 |
| ·植物和病毒互作中小分子RNA的研究 | 第56页 |
| ·植物和细菌互作中小分子RNA的研究 | 第56-57页 |
| ·植物和真菌互作中小分子RNA的研究 | 第57页 |
| 4 植物防御系统中小分子RNA与DNA甲基化的关系 | 第57-58页 |
| 5 病原菌的RNA沉默抑制子 | 第58页 |
| 6 大豆与苜蓿中miRNA的相关研究 | 第58-63页 |
| 第四章 本研究的目的和意义 | 第63-65页 |
| 下篇 研究报告 | 第65-120页 |
| 第一章 植物基因沉默系统与对卵菌抗性的关系研究 | 第66-76页 |
| 摘要 | 第66-67页 |
| 1 材料与方法 | 第67-70页 |
| ·植物材料和培养条件 | 第67-68页 |
| ·质粒和菌株 | 第68页 |
| ·游动孢子的获得 | 第68页 |
| ·接种方法 | 第68页 |
| ·基因表达检测 | 第68-69页 |
| ·农杆菌介导的瞬时表达 | 第69页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第69-70页 |
| 2 结果与分析 | 第70-73页 |
| ·PVX::p19和PVX::GFP瞬时表达载体构建 | 第70页 |
| ·p19注射烟草后的表达分析 | 第70-71页 |
| ·基因沉默突变体与疫霉菌的抗性 | 第71-72页 |
| ·p19能够抑制植物对疫霉菌的抗性 | 第72-73页 |
| 3 讨论与结论 | 第73-76页 |
| 第二章 栽培大豆中miRNA的预测 | 第76-92页 |
| 摘要 | 第76-77页 |
| 1 材料与方法 | 第77-81页 |
| ·相关数据库的获得 | 第77-78页 |
| ·应用软件 | 第78页 |
| ·试剂配制 | 第78-79页 |
| ·poly(A)-tailed RT-PCR | 第79-81页 |
| ·总RNA的提取 | 第79页 |
| ·总RNA的poly(A)加尾 | 第79页 |
| ·反转录获得cDNA | 第79-80页 |
| ·PCR扩增、非变性聚丙烯酰胺电泳及银染 | 第80-81页 |
| 2 结果与分析 | 第81-90页 |
| ·同源搜素方法预测栽培大豆miRNA | 第81-85页 |
| ·miRNA的特征分析 | 第85页 |
| ·预测miRNA的实验验证 | 第85-87页 |
| ·某些miRNA可能受环境胁迫的诱导和调控,并在特定组织中表达 | 第87-88页 |
| ·候选miRNA靶标预测 | 第88-90页 |
| 3 讨论与结论 | 第90-92页 |
| ·miRNA预测 | 第90页 |
| ·miRNA的鉴定方法 | 第90-91页 |
| ·EST分析预测miRNA的局限性 | 第91页 |
| ·miRNA可能在逆境胁迫中调控基因的表达 | 第91-92页 |
| 第三章 大豆中保守miRNA的表达分析 | 第92-98页 |
| 摘要 | 第92页 |
| 1 材料与方法 | 第92-96页 |
| ·供试品种及接种菌株 | 第92-93页 |
| ·大豆植株的培养 | 第93页 |
| ·离体子叶节法接种 | 第93页 |
| ·实验设备 | 第93页 |
| ·试剂配制 | 第93-94页 |
| ·总RNA提取 | 第94页 |
| ·小分子RNA的富集 | 第94页 |
| ·电泳 | 第94-95页 |
| ·杂交 | 第95页 |
| ·本实验中使用到的探针序列 | 第95-96页 |
| 2 结果与分析 | 第96-97页 |
| ·抗病性测定 | 第96-97页 |
| ·miRNA在大豆中的表达 | 第97页 |
| 3 讨论与结论 | 第97-98页 |
| 第四章 与大豆疫霉菌侵染相关和抗性类型相关的miRNA的鉴定 | 第98-110页 |
| 摘要 | 第98-99页 |
| 1 材料与方法 | 第99-102页 |
| ·V8固体培养基的制备 | 第99页 |
| ·供试菌株和大豆品种 | 第99-100页 |
| ·接种方法 | 第100页 |
| ·microRNA芯片杂交与芯片分析 | 第100-101页 |
| ·用于芯片的RNA样品提取 | 第101-102页 |
| ·芯片数据的验证 | 第102页 |
| 2 结果与分析 | 第102-108页 |
| ·芯片探针的来源 | 第102页 |
| ·芯片的检测率 | 第102-104页 |
| ·芯片结果的可靠性分析 | 第104页 |
| ·与大豆疫霉菌侵染相关的miRNA | 第104-105页 |
| ·与抗性类型相关的miRNA | 第105-108页 |
| 3 讨论与结论 | 第108-110页 |
| ·利用qRT-PCR验证芯片结果的有效性 | 第108页 |
| ·miRNA芯片的假阳性 | 第108页 |
| ·抗感品种间miRNA的比较 | 第108-110页 |
| 第五章 miRNA靶基因的预测及功能分析 | 第110-120页 |
| 摘要 | 第110-111页 |
| 1 材料与方法 | 第111-116页 |
| ·植物材料、菌株及载体 | 第111页 |
| ·试剂配制 | 第111-112页 |
| ·反转录合成cDNA | 第112页 |
| ·靶基因的定量PCR | 第112-113页 |
| ·基因组DNA的提取(CTAB-SDS法) | 第113页 |
| ·PCR扩增miRNA的前体 | 第113-114页 |
| ·门载体的构建 | 第114页 |
| ·过量表达目的载体的构建 | 第114-115页 |
| ·发根农杆菌K599感受态细胞的制备 | 第115页 |
| ·电击转化 | 第115页 |
| ·农杆菌介导的大豆遗传转化(根毛转化) | 第115-116页 |
| 2 结果与分析 | 第116-119页 |
| ·miRNA靶标的预测及定量分析 | 第116-117页 |
| ·Gateway过量表达载体的构建 | 第117-119页 |
| ·阳性根毛的鉴定及初步分析 | 第119页 |
| 3 讨论与结论 | 第119-120页 |
| 全文结论 | 第120-122页 |
| 本研究创新之处 | 第122-124页 |
| 参考文献 | 第124-146页 |
| 附录 | 第146-180页 |
| 攻读博士期间发表或待发表的论文 | 第180-182页 |
| 致谢 | 第182页 |
