| 目录 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-13页 |
| ABSTRACT | 第13-17页 |
| 第一部分 肺癌功能性单抗识别的膜蛋白抗原的研究 | 第17-57页 |
| 前言 | 第17-18页 |
| 一. 材料与方法 | 第18-27页 |
| (一) 实验材料 | 第18-21页 |
| 1. 细胞系 | 第18页 |
| 2. 组织标本 | 第18页 |
| 3. 动物 | 第18页 |
| 4. 主要试剂及耗材 | 第18-20页 |
| 5. 主要仪器 | 第20-21页 |
| 6. 分析软件 | 第21页 |
| (二) 实验方法 | 第21-27页 |
| 1. 细胞培养 | 第21页 |
| 2. 无血清杂交瘤上清的收集 | 第21-22页 |
| 3. 细胞免疫荧光实验 | 第22-23页 |
| 4. 免疫组化实验 | 第23-24页 |
| 5. ELISA(杂交瘤上清产量的测定) | 第24页 |
| 6. 抗肺癌单克隆抗体的纯化 | 第24页 |
| 7. 裸鼠体内移植瘤抑制实验 | 第24-25页 |
| 8. 抗体体外功能实验 | 第25-26页 |
| 9. 统计分析 | 第26-27页 |
| 二. 结果 | 第27-54页 |
| 1. 固定细胞荧光法检测单克隆抗体靶抗原在三种肺癌细胞系中的表达 | 第27-29页 |
| 2. 活细胞荧光法检测单克隆抗体靶抗原在三种肺癌细胞系胞膜中的表达 | 第29-30页 |
| 3. 流式细胞荧光法检测单克隆抗体靶抗原在三种肺癌细胞系中的表达比例 | 第30-31页 |
| 4. 免疫组织化学法检测单克隆抗体靶抗原在肺癌组织中的表达特异性 | 第31-42页 |
| 5. 单克隆抗体靶抗原的体内功能研究 | 第42-46页 |
| 6. 单克隆抗体纯化 | 第46-47页 |
| 7. 单克隆抗体5E6的靶抗原体外对肺癌细胞系生物学功能的影响 | 第47-50页 |
| 8. 单克隆抗体12H6体外对肺癌细胞系生物学功能的影响 | 第50-54页 |
| 三. 讨论 | 第54-56页 |
| 四. 小结 | 第56-57页 |
| 第二部分 肺癌功能性单抗的靶抗原在肺癌干细胞中的表达与作用 | 第57-72页 |
| 前言 | 第57-58页 |
| 一. 材料与方法 | 第58-62页 |
| (一) 实验材料 | 第58-59页 |
| 1. 细胞及动物 | 第58页 |
| 2. 主要试剂 | 第58-59页 |
| 3. 主要仪器与设备 | 第59页 |
| 4. 计算机分析软件 | 第59页 |
| (二) 实验方法 | 第59-62页 |
| 1. 肺癌细胞及杂交瘤细胞的培养 | 第59页 |
| 2. 肺癌干细胞相关亚群的无血清悬浮培养(sphere培养) | 第59-60页 |
| 3. PKH26染色 | 第60页 |
| 4. 双色流式荧光分析 | 第60页 |
| 5. 双色固定细胞免疫荧光 | 第60-61页 |
| 6. 肺癌干细胞自我更新能力检测 | 第61页 |
| 7. 耐药能力检测 | 第61页 |
| 8. 统计学分析 | 第61-62页 |
| 二. 结果 | 第62-69页 |
| (一) 人肺癌细胞系A549中干细胞的分离鉴定 | 第62-64页 |
| 1. 无血清悬浮培养法对干细胞样细胞的富集 | 第62-63页 |
| 2. PKH26染色检测肺癌干细胞 | 第63页 |
| 3. 流式细胞术检测亲本及Sphere细胞中肺癌干细胞相关标志物的表达 | 第63-64页 |
| (二) 单克隆抗体靶抗原的干性特征研究 | 第64-69页 |
| 1. 流式细胞荧光法检测单克隆抗体所识别的细胞在sphere细胞中的富集 | 第64页 |
| 2. PKH26检测5E6单抗识别的肺癌干细胞 | 第64-65页 |
| 3. 双色流式荧光法检测5E6和肺癌干细胞标志物双阳性细胞的比例 | 第65-66页 |
| 4. 流式分选法研究5E6阳性细胞的耐药特征 | 第66-67页 |
| 5. 单抗5E6靶抗原对肺癌干细胞自我更新能力的影响 | 第67页 |
| 6. 单抗5E6的靶抗原对肺癌干细胞侵袭能力的影响 | 第67-68页 |
| 7. 单抗5E6靶抗原对肺癌干细胞迁移能力的影响 | 第68-69页 |
| 三. 讨论 | 第69-71页 |
| 四. 小结 | 第71-72页 |
| 第三部分 肺癌干细胞相关功能性膜蛋白的分离与鉴定 | 第72-86页 |
| 前言 | 第72-73页 |
| 一. 材料与方法 | 第73-78页 |
| (一) 实验材料 | 第73页 |
| 1. 细胞系 | 第73页 |
| 2. 主要试剂及耗材 | 第73页 |
| 3. 主要仪器 | 第73页 |
| 4. 分析软件 | 第73页 |
| (二) 实验方法 | 第73-78页 |
| 1. 细胞总蛋白的提取(RIPA法) | 第73-74页 |
| 2. 细胞水溶性蛋白与膜溶性蛋白的提取 | 第74页 |
| 3. BCA蛋白定量法 | 第74页 |
| 4. 抗体亲和层析柱的制备 | 第74-75页 |
| 5. 亲和层析纯化抗原蛋白 | 第75页 |
| 6. Western blotting | 第75-76页 |
| 7. IP | 第76-77页 |
| 8. 统计分析 | 第77-78页 |
| 二. 结果 | 第78-84页 |
| 1. western bolt法检测单抗5E6靶抗原的分子量 | 第78页 |
| 2. 免疫亲和纯化单抗5E6的靶抗原 | 第78-79页 |
| 3. 质谱鉴定单抗5E6的靶抗原 | 第79页 |
| 4. 免疫细胞荧光法回证单抗5E6的靶抗原蛋白 | 第79页 |
| 5. CO-IP法回证单抗5E6的靶抗原蛋白 | 第79-81页 |
| 6. western bolt法检测单抗12H6靶抗原的分子量 | 第81-82页 |
| 7. 免疫亲和纯化单抗12H6的靶抗原 | 第82-83页 |
| 8. 质谱鉴定单抗12H6的靶抗原 | 第83-84页 |
| 三. 讨论 | 第84-85页 |
| 四. 小结 | 第85-86页 |
| 单克隆抗体抗肿瘤药物研究进展 | 第86-91页 |
| 参考文献 | 第91-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第95页 |
