| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 主要符号对照表 | 第12-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-27页 |
| ·巴氏杆菌流行病学调查 | 第13-16页 |
| ·禽巴氏杆菌病 | 第14-15页 |
| ·牛、羊、兔巴氏杆菌病 | 第15-16页 |
| ·猪巴氏杆菌病 | 第16页 |
| ·其它野生动物巴氏杆菌病 | 第16页 |
| ·多杀性巴氏杆菌检测、鉴定和分型研究 | 第16-19页 |
| ·血清学分型 | 第16-17页 |
| ·分子生物学检测、鉴定和分型方法 | 第17-19页 |
| ·多杀性巴氏杆菌毒力因子及免疫原研究进展 | 第19-25页 |
| ·荚膜及相关蛋白 | 第19-20页 |
| ·多杀性巴氏杆菌毒素（PMT） | 第20页 |
| ·交叉保护因子（CPF） | 第20-21页 |
| ·黏附因子 | 第21-22页 |
| ·脂多糖（LPS） | 第22页 |
| ·外膜蛋白 | 第22-23页 |
| ·OmpH 的研究 | 第23-25页 |
| ·研究的目的及意义 | 第25-26页 |
| ·研究内容及技术路线 | 第26-27页 |
| ·主要内容 | 第26页 |
| ·技术路线 | 第26-27页 |
| 第2章 牦牛多杀性巴氏杆菌 P0910 外膜蛋白 H 基因的克隆与序列分析 | 第27-42页 |
| ·材料 | 第27-29页 |
| ·菌株与质粒 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·常用溶液的配置 | 第27-28页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-35页 |
| ·OmpH 引物设计 | 第29-30页 |
| ·P0910 细菌基因组的提取 | 第30页 |
| ·PCR 扩增目的条带 | 第30-31页 |
| ·PCR 产物 OmpH 片段的回收 | 第31-32页 |
| ·PCR 产物的加尾 | 第32页 |
| ·外源目的片段 DNA 与 pMD19-T Simple 载体的连接 | 第32页 |
| ·感受态细胞的制备（YC 法） | 第32页 |
| ·重组质粒的转化 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的提取 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第34页 |
| ·重组质粒的测序 | 第34-35页 |
| ·结果与分析 | 第35-39页 |
| ·PCR 扩增及胶回收产物 | 第35-36页 |
| ·重组质粒的构建流程图 | 第36-37页 |
| ·重组质粒的 PCR 鉴定 | 第37页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第37-38页 |
| ·序列测定 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-42页 |
| 第3章 OmpH 基因原核表达载体的选择构建及蛋白表达 | 第42-75页 |
| ·材料 | 第42-45页 |
| ·菌株与质粒 | 第42页 |
| ·酶及主要试剂 | 第42页 |
| ·主要试剂的配置 | 第42-44页 |
| ·主要实验仪器 | 第44-45页 |
| ·方法 | 第45-56页 |
| ·构建 pET-32a-OmpH 重组质粒 | 第45-48页 |
| ·构建 pCold-OmpH 重组质粒 | 第48-50页 |
| ·构建 pMAL-OmpH 重组质粒 | 第50-53页 |
| ·重组表达系统 pMAL-OmpH／BL-21 条件优化 | 第53页 |
| ·目的蛋白的纯化、浓缩 | 第53-54页 |
| ·用 BCA 蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度 | 第54-55页 |
| ·重组蛋白免疫原性的检测 | 第55-56页 |
| ·结果与分析 | 第56-70页 |
| ·表达系统 pET-32a-OmpH 的构建及分析 | 第56-59页 |
| ·表达系统 pCold-OmpH 的构建及分析 | 第59-62页 |
| ·表达系统 pMAL-OmpH 的构建及分析 | 第62-65页 |
| ·重组表达系统 pMAL-OmpH／BL-21 条件优化 | 第65-68页 |
| ·重组蛋白的纯化、浓缩 | 第68页 |
| ·重组蛋白的浓度测定 | 第68-69页 |
| ·重组蛋白免疫原性的检测 | 第69-70页 |
| ·讨论 | 第70-75页 |
| ·目的基因的选择 | 第70页 |
| ·表达系统的选择 | 第70-72页 |
| ·亲和标签及蛋白纯化 | 第72-75页 |
| 第4章 免疫小鼠效果评价 | 第75-82页 |
| ·材料 | 第75页 |
| ·实验动物 | 第75页 |
| ·主要试剂 | 第75页 |
| ·方法 | 第75-77页 |
| ·毒力实验 | 第75页 |
| ·外膜蛋白的提取 | 第75-76页 |
| ·灭活菌的制备 | 第76页 |
| ·疫苗的制备 | 第76页 |
| ·动物实验 | 第76-77页 |
| ·结果与分析 | 第77-80页 |
| ·小鼠毒力实验测定 | 第77-78页 |
| ·灭活菌的制备 | 第78页 |
| ·疫苗的制备 | 第78页 |
| ·ELISA 检测血清抗体效价 | 第78-79页 |
| ·攻毒保护实验 | 第79-80页 |
| ·讨论 | 第80-82页 |
| 全文总结 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 附图 | 第92-93页 |
| 作者简介 | 第93页 |
