猪原始生殖细胞体内跟踪、体外培养及遗传印记的研究
| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 1 前言 | 第13-29页 |
| ·猪多能干细胞研究进展 | 第13-16页 |
| ·胚胎干细胞(ES)的研究进展 | 第13-14页 |
| ·诱导多能干细胞(iPS)的研究进展 | 第14-15页 |
| ·胚胎生殖细胞(EG)的研究进展 | 第15-16页 |
| ·哺乳动物原始生殖细胞的发育 | 第16-20页 |
| ·原始生殖细胞特化的信号调控 | 第16-17页 |
| ·小鼠原始生殖细胞的迁移 | 第17-18页 |
| ·人原始生殖细胞的迁移 | 第18页 |
| ·猪原始生殖细胞的迁移 | 第18页 |
| ·原始生殖细胞甲基化的去除与重建 | 第18-20页 |
| ·胚胎生殖细胞培养的影响因素 | 第20-27页 |
| ·饲养层对胚胎生殖细胞的影响 | 第20-21页 |
| ·细胞生长因子对胚胎生殖细胞的影响 | 第21-23页 |
| ·胚胎日龄对胚胎生殖细胞的影响 | 第23页 |
| ·分离方法对胚胎生殖细胞的影响 | 第23-24页 |
| ·胚胎生殖细胞的传代 | 第24页 |
| ·胚胎生殖细胞的鉴定 | 第24-27页 |
| ·本研究的目的意义 | 第27-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-48页 |
| ·实验材料 | 第29-33页 |
| ·实验动物 | 第29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29-30页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第30-31页 |
| ·常用试剂及配制 | 第31-33页 |
| ·主要的生物信息学网站及分析软件 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-48页 |
| ·猪生殖嵴组织学切片制作 | 第33-34页 |
| ·苏木素-伊红染色 | 第34页 |
| ·组织切片免疫荧光 | 第34-35页 |
| ·猪原始生殖细胞的分离 | 第35页 |
| ·Realtime PCR | 第35-38页 |
| ·亚硫酸氢盐修饰后测序的甲基化分析 | 第38-43页 |
| ·胚胎生殖细胞培养用饲养层的制备 | 第43-44页 |
| ·胚胎生殖细胞的原代培养 | 第44页 |
| ·胚胎生殖细胞的传代培养 | 第44页 |
| ·猪胚胎生殖细胞的鉴定 | 第44-48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-70页 |
| ·猪生殖嵴形态变化及原始生殖细胞跟踪 | 第48-51页 |
| ·猪生殖嵴形态变化跟踪 | 第48-49页 |
| ·猪原始生殖细胞在体内迁移跟踪 | 第49-51页 |
| ·猪原始生殖细胞印记基因表达的变化 | 第51-54页 |
| ·Realtime PCR反应的特异性 | 第52-53页 |
| ·印记基因的表达 | 第53-54页 |
| ·猪原始生殖细胞印记基因甲基化的变化 | 第54-57页 |
| ·IGF2基因的甲基化 | 第55-56页 |
| ·H19基因的甲基化 | 第56-57页 |
| ·猪胚胎生殖细胞的培养 | 第57-70页 |
| ·饲养层细胞的形态特征 | 第57页 |
| ·胚胎生殖细胞的形态特征 | 第57-58页 |
| ·不同胚胎日龄对胚胎生殖细胞培养的影响 | 第58-59页 |
| ·不同来源饲养层对胚胎生殖细胞培养的影响 | 第59-60页 |
| ·不同传代方式对胚胎生殖细胞培养的影响 | 第60-62页 |
| ·胚胎生殖细胞的鉴定 | 第62-70页 |
| 4 讨论 | 第70-76页 |
| ·猪原始生殖细胞的迁移 | 第70-71页 |
| ·生殖嵴的形成 | 第70页 |
| ·原始生殖细胞的迁移 | 第70-71页 |
| ·印记基因的研究 | 第71-73页 |
| ·DNA甲基化与基因表达 | 第71-72页 |
| ·印记基因的甲基化 | 第72-73页 |
| ·胚胎生殖细胞培养的影响因素 | 第73-76页 |
| ·饲养层细胞对胚胎生殖细胞培养的影响 | 第73-74页 |
| ·胚胎日龄对胚胎生殖细胞培养的影响 | 第74页 |
| ·胚胎生殖细胞的定向诱导分化 | 第74-76页 |
| 5 结论 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-87页 |
| 攻读博士期间发表的学术论文 | 第87页 |
