| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-18页 |
| 第一章 绪论 (Chapter 1. Introduction) | 第18-28页 |
| ·高等药用真菌 (Medicinal higher fungi) | 第18页 |
| ·灵芝及其活性成分 (Ganoderma lucidum and its bioactive components) | 第18-21页 |
| ·灵芝 (Ganoderma lucidum) | 第18-19页 |
| ·灵芝的活性成分 (Bioactive components of G. lucidum) | 第19页 |
| ·灵芝酸及其药理活性 (Ganoderic acid (GA) and its pharmacological activities) | 第19-21页 |
| ·灵芝酸的发酵生产及其研究进展 (GA fermentation and research progress) | 第21-23页 |
| ·灵芝酸的生物合成途径 (GA biosynthetic pathway) | 第23-24页 |
| ·钙信号对细胞生长和代谢的影响 (Effects of Ca~(2+)signals on cell growth and metabolism) | 第24-25页 |
| ·高等药用真菌及灵芝的基因转化体系 (Gene transformation system of mushrooms and G. lucidum) | 第25-26页 |
| ·代谢工程在改造萜类生物合成中的应用 (Improvement of terpenoids biosynthesis by metabolic engineering) | 第26页 |
| ·本文的立题目的与意义 (Aim and significance of this thesis work) | 第26-27页 |
| ·本文的主要研究内容 (Main research work of this thesis) | 第27-28页 |
| 第二章 液体振荡和静置培养方式下灵芝酸积累比较及差异表达基因的鉴定(Chapter 2. Comparison of GA accumulation and identification of differentially expressed genes in liquid static culture vs. shaking culture of G. lucidum) | 第28-45页 |
| ·前言 (Introduction) | 第28-29页 |
| ·实验材料与方法 (Materials and methods) | 第29-37页 |
| ·菌种 (Strain) | 第29页 |
| ·试剂与仪器 (Reagents and instrument) | 第29-30页 |
| ·灵芝培养 (Cultivation of G. lucidum) | 第30-31页 |
| ·分析方法 (Analytical methods) | 第31-33页 |
| ·总 RNA 的提取 (Total RNA extraction) | 第33-34页 |
| ·反转录 (Reverse transcription) | 第34-35页 |
| ·基因表达的 qRT-PCR 检测 (Detection of gene transcription by qRT-PCR) | 第35-36页 |
| ·差减杂交文库的建立 (Construction of SSH library) | 第36-37页 |
| ·阳性克隆的测序与生物信息学分析 (Sequencing and bioinformatic analysis of postive colonies) | 第37页 |
| ·数据分析 (Data analysis) | 第37页 |
| ·实验结果与讨论 (Results and discussion) | 第37-44页 |
| ·液体振荡和静置培养条件下灵芝菌丝体的形态 (Observation of cell morphology under liquid shaking culture and static culture) | 第37-39页 |
| ·液体振荡和静置培养条件下灵芝细胞生长和灵芝酸合成的动态变化 (Kinetic profiles of cell growth and GA accumulation under liquid shaking culture and static culture) | 第39页 |
| ·液体振荡和静置培养条件下灵芝酸生物合成基因转录水平的动态变化(Kinetic profiles of the transcriptional levels of GA biosynthetic genes under liquid shaking culture and static culture) | 第39-43页 |
| ·液体振荡和静置培养条件下差异表达基因的筛选与鉴定 (Screening and identification of differentially expressed genes under liquid shaking culture and static culture) | 第43-44页 |
| ·小结 (Conclusion) | 第44-45页 |
| 第三章 金属离子对灵芝酸生产的影响 (Chapter 3. Effects of metal ions on GA production) | 第45-60页 |
| ·前言 (Introduction) | 第45页 |
| ·实验材料与方法 (Materials and methods) | 第45-46页 |
| ·试剂与仪器 (Reagents and equipment) | 第45-46页 |
| ·灵芝菌丝体培养 (Cultivation of G. lucidum) | 第46页 |
| ·分析方法 (Analytic methods) | 第46页 |
| ·胞内外金属离子含量的测定 (Determination of extracellular and intracellular concentrations of metal ions) | 第46页 |
| ·实验结果与讨论 (Results and discussion) | 第46-59页 |
| ·添加不同浓度的各种金属离子对细胞生长和灵芝酸产量的影响 (Effects of different metal ions in medium on cell growth and GA production) | 第46-50页 |
| ·不同时间点添加各种金属离子对细胞生长和灵芝酸产量的影响 (Effects of addition time of different metal ions on cell growth and GA production) | 第50-53页 |
| ·金属离子添加对胞内外相应离子的浓度及胞内外钙离子浓度的影响(Effects of metal ions addition on the intracellular and extracellular concentrations of corresponding metal ion as well as the intracellular and extracellular Ca~(2+)concentration) | 第53-57页 |
| ·钙离子、钠离子和锰离子组合添加对灵芝酸产量的影响 (Effects of combined addition of Ca~(2+), Na+and Mn~(2+)on GA productions) | 第57-59页 |
| ·小结 (Conclusion) | 第59-60页 |
| 第四章 钙调磷脂酶信号对灵芝酸生物合成的影响 (Chapter. 4 Imapcts ofcalcineurin signals on GA biosynthesis) | 第60-81页 |
| ·前言 (Introduction) | 第60页 |
| ·实验材料与方法 (Materials and methods) | 第60-64页 |
| ·试剂与仪器 (Reagents and equipment) | 第60-61页 |
| ·灵芝培养 (Cultivation of G. lucidum) | 第61页 |
| ·分析方法 (Analytic methods) | 第61页 |
| ·钙调磷脂酶信号抑制剂添加对灵芝酸合成的影响 (Effects of calcineruin signal inhibitors on GA biosynthesis) | 第61页 |
| ·Fluo-3/AM 法检测胞内钙离子 (Measurement of intracellular Ca~(2+) levels by Fluo-3/AM) | 第61页 |
| ·孢子取样和孢子计数 (Spore sampling and counting) | 第61-62页 |
| ·总 RNA 提取 (Total RNA extraction) | 第62页 |
| ·反转录 (Reverse transcription) | 第62页 |
| ·灵芝钙调磷脂酶信号途径 cam，cna 和 crz1 基因片段的克隆 (Gene cloning of cam, cna and crz1 in calcineurin signaling pathway of G. lucidum) | 第62-63页 |
| ·基因表达的 qRT-PCR 检测 (Detection of gene transcription by qRT-PCR) | 第63-64页 |
| ·实验结果与讨论 (Results and discussion) | 第64-80页 |
| ·钙调磷脂酶信号对灵芝细胞生长、孢子数和灵芝酸合成的影响 (Effects of calcineurin signals on cell growth, spore number and GA biosynthesis) | 第64-67页 |
| ·钙调磷脂酶信号对胞内钙离子的影响 (Effects of calcineurin signals on the levels of intracellular Ca~(2+)) | 第67-69页 |
| ·CaM，Cna 和 Crz1 基因片段的克隆与分析 (Gene cloning and sequence analysis of cam, cna and crz1) | 第69-73页 |
| ·钙调磷脂酶信号对钙交换体、钙感应蛋白和灵芝酸生物合成基因的转录水平的影响 (Effects of calcineurin signals on the gene transcriptional levels of Ca~(2+)exchangers, Ca~(2+)sensors and GA biosynthesis) | 第73-80页 |
| ·小结 (Conclusion) | 第80-81页 |
| 第五章 高表达灵芝 HMGR 基因对灵芝酸生物合成的影响 (Chapter 5Effects of overexpressing hmgr gene on GA accumulation by G. lucidum) | 第81-93页 |
| ·前言 (Introduction) | 第81-82页 |
| ·实验材料与方法 (Materials and methods) | 第82-86页 |
| ·试剂与仪器 (Reagents and equipment) | 第82页 |
| ·菌种和质粒 (Strains and plasmids) | 第82页 |
| ·HMGR 高表达质粒 pJW-HMGR 的构建与转化 (Construction and transformation of HMGR overexpressing plasmid pJW-HMGR) | 第82-84页 |
| ·转化子的 PCR 和 Southern blot 验证 (Identification of transformants by PCR and Southern blot) | 第84页 |
| ·灵芝菌丝体培养 (Mycelia cultivation of G. lucidum) | 第84页 |
| ·分析方法 (Analytic methods) | 第84-86页 |
| ·实验结果与讨论 (Results and discussion) | 第86-92页 |
| ·HMGR 基因高表达的灵芝工程菌株的获得与鉴定 (Identification of HMGR overexpressed strains) | 第86-88页 |
| ·高表达 HMGR 基因对灵芝酸和中间代谢物积累的影响 (Effects of overexpression of HMGR gene on the accumulations of GA and intermediates) | 第88-91页 |
| ·高表达 HMGR 基因对灵芝酸合成基因转录水平的影响 (Effects of overexpression of HMGR gene on the transcriptional levels of the GA biosynthetic genes) | 第91-92页 |
| ·小结 (Conclusion) | 第92-93页 |
| 第六章 结论与展望 (Chapter 6. Conclusions and perspectives) | 第93-96页 |
| ·全文结论 (Conclusions) | 第93-94页 |
| ·本文的特色与创新点 (Highlights) | 第94页 |
| ·展望 (Perspectives) | 第94-96页 |
| 参考文献(References) | 第96-107页 |
| 附录 (Appendix) | 第107-130页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文(Publication List) | 第130-132页 |
| 致谢 | 第132-134页 |
