| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1.前言 | 第11-23页 |
| ·赖氨酸在畜牧业上的应用 | 第11-15页 |
| ·赖氨酸的微生物合成途径 | 第11-12页 |
| ·赖氨酸作为饲料添加剂的功效 | 第12-13页 |
| ·L-赖氨酸在畜牧业上的应用 | 第13页 |
| ·高赖氨酸蛋白基因及其在转基因方面的研究进展 | 第13-15页 |
| ·蛋氨酸在畜牧业上的应用 | 第15-16页 |
| ·应用 | 第15-16页 |
| ·高蛋氨酸蛋白基因的研究进展 | 第16页 |
| ·赖氨酸和蛋氨酸共同作用于动物的研究进展 | 第16-17页 |
| ·益生菌在畜牧业上的应用 | 第17-19页 |
| ·益生菌定义及分类 | 第17-18页 |
| ·益生菌作为饲料添加剂的必备条件 | 第18页 |
| ·益生菌的作用及应用 | 第18-19页 |
| ·枯草芽孢杆菌概述及其在转基因方面的研究进展 | 第19-22页 |
| ·枯草芽孢杆菌的介绍 | 第19-20页 |
| ·枯草芽孢杆菌外源基因表达系统 | 第20-21页 |
| ·枯草芽孢杆菌在畜牧业上的应用 | 第21-22页 |
| ·研究目的和意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-39页 |
| ·材料 | 第23-26页 |
| ·实验材料 | 第23-24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·实验药品 | 第24页 |
| ·实验仪器 | 第24-25页 |
| ·主要试剂和缓冲溶液 | 第25页 |
| ·引物设计 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-30页 |
| ·原料总 RNA 的提取及 cDNA 的形成 | 第26-29页 |
| ·PCR 扩增产物的转化和序列测定 | 第29-30页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达载体的构建及转化 | 第30-35页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达载体 pHT43/Cflr 的构建 | 第30-32页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达载体 pHT43/zein 的构建 | 第32-34页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达载体 pHT43/Cflr 和 pHT43/zein 的转化 | 第34-35页 |
| ·高赖氨酸蛋白基因和高蛋氨酸蛋白基因在 mRNA 水平的表达 | 第35-36页 |
| ·高赖氨酸蛋白基因和高蛋氨酸蛋白基因的诱导表达 | 第36页 |
| ·HPLC 检测枯草芽孢杆菌重组发酵菌液中赖氨酸和蛋氨酸的含量 | 第36-38页 |
| ·数据处理 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-55页 |
| ·基因的扩增 | 第39-44页 |
| ·高赖氨酸蛋白基因 Cflr 的扩增 | 第39-41页 |
| ·高蛋氨酸蛋白基因 zein 的扩增 | 第41-44页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达载体 pHT43/Cflr 和 pHT43/zein 的构建 | 第44-46页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达载体 pHT43/Cflr 构建 | 第44页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达载体 pHT43/zein 的构建 | 第44-46页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达载体 pHT43/Cflr 和 pHT43/zein 的转化 | 第46-48页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达载体 pHT43/Cflr 的转化 | 第46页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达载体 pHT43/zein 的转化 | 第46-48页 |
| ·重组质粒 pHT43/Cflr 和 pHT43/zein 的稳定性 | 第48页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达载体 pHT43/Cflr 和 pHT43/zein 在 mRNA 水平的表达 | 第48-49页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达载体 pHT43/Cflr 和 pHT43/zein 在蛋白水平的表达 | 第49-50页 |
| ·HPLC 检测重组菌发酵液中赖氨酸和蛋氨酸的含量 | 第50-55页 |
| 4 讨论 | 第55-62页 |
| ·RNA 的提取 | 第55-56页 |
| ·目的基因的克隆 | 第56-57页 |
| ·表达载体的构建 | 第57-58页 |
| ·枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备和转化方法的选择 | 第58-59页 |
| ·IPTG 诱导枯草芽孢杆菌中目的基因的表达 | 第59页 |
| ·重组菌中 Lys 和 Met 含量的测定 | 第59-60页 |
| ·重组的枯草芽孢杆菌应用于奶牛生产中的安全性问题 | 第60-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-73页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第73页 |
