| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 前言 | 第9-11页 |
| 第1章 综述部分 | 第11-30页 |
| 1 流感病毒介绍 | 第11-21页 |
| ·流感病毒的分子遗传学 | 第11-17页 |
| ·流感病毒的基因组介绍 | 第11-12页 |
| ·流感病毒的结构 | 第12-17页 |
| ·2009甲型流感病毒 | 第17-19页 |
| ·2009甲型流感病毒介绍 | 第17-18页 |
| ·甲流(H1N1)的来由及名称的变化 | 第18页 |
| ·甲流(H1N1)病毒的特征 | 第18-19页 |
| ·甲型H1N1流感的临床研究 | 第19页 |
| ·流感病毒核酸检测方法介绍 | 第19-21页 |
| ·普通RTPCR | 第19-20页 |
| ·实时荧光定量RTPCR | 第20页 |
| ·基因芯片 | 第20页 |
| ·逆转录-环介导等温扩增(RT-LAMP) | 第20-21页 |
| ·依赖核酸序列的扩增技术(NASBA) | 第21页 |
| 2 荧光定量PCR | 第21-28页 |
| ·荧光定量PCR介绍 | 第21-23页 |
| ·荧光定量PCR种类划分 | 第23-28页 |
| ·SYBR Green法 | 第23页 |
| ·水解探针法 | 第23-25页 |
| ·杂交探针法 | 第25-27页 |
| ·荧光引物 | 第27-28页 |
| 3 研究框架 | 第28-30页 |
| ·研究目的 | 第28页 |
| ·研究内容 | 第28-30页 |
| 第2章 实验部分 | 第30-80页 |
| 1 2009甲型流感病毒的分离 | 第30-39页 |
| ·采集09甲流疑似病例临床样本 | 第30-31页 |
| ·引言 | 第30页 |
| ·实验材料 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-31页 |
| ·提取临床样本RNA | 第31-34页 |
| ·引言 | 第31-32页 |
| ·实验材料 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-34页 |
| ·荧光定量PCR(Taqman)检测临床样本RNA | 第34-36页 |
| ·引言 | 第34页 |
| ·实验材料 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-36页 |
| ·鸡胚分离培养2009甲型流感病毒 | 第36-39页 |
| ·引言 | 第36页 |
| ·实验材料 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-39页 |
| ·实验结果 | 第39页 |
| ·荧光定量PCR(Taqman)检测临床样本RNA | 第39页 |
| ·鸡血细胞凝聚实验验证甲流病毒培养液 | 第39页 |
| 2 09甲流病毒HA基因的克隆 | 第39-53页 |
| ·引言 | 第39-40页 |
| ·实验材料 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-51页 |
| ·合成引物 | 第41页 |
| ·RTPCR扩增目的基因HA | 第41-42页 |
| ·09甲流病毒HA基因的琼脂糖凝胶回收 | 第42-43页 |
| ·09甲流病毒HA基因连接T载体 | 第43-44页 |
| ·氯化钙制备感受态大肠杆菌 | 第44-46页 |
| ·HA-T质粒转化入大肠杆菌 | 第46-47页 |
| ·菌液PCR筛选HA-T质粒阳性菌落 | 第47-48页 |
| ·从HA-T质粒阳性菌株中提取质粒DNA | 第48-50页 |
| ·pMD18-T-HA重组质粒测序及序列分析 | 第50-51页 |
| ·实验结果 | 第51-53页 |
| ·RTPCR扩增目的基因HA | 第51-52页 |
| ·菌液PCR筛选HA-T质粒阳性菌落 | 第52页 |
| ·pMD18-T-HA重组质粒测序及序列分析 | 第52-53页 |
| 3 体外转录制备HA基因RNA | 第53-57页 |
| ·引言 | 第53页 |
| ·实验材料 | 第53-54页 |
| ·实验方法 | 第54-56页 |
| ·合成引物 | 第54页 |
| ·实验步骤 | 第54-56页 |
| ·实验结果 | 第56页 |
| ·微量核酸浓度测定仪测定RNA浓度 | 第56页 |
| ·RNA电泳观察体外转录RNA纯度 | 第56页 |
| ·结果分析 | 第56-57页 |
| 4 荧光定量PCR阶段实验 | 第57-80页 |
| ·设计针对09甲流基因组保守区域的荧光定量PCR引物及taqman探针 | 第57-60页 |
| ·引言 | 第57-58页 |
| ·实验材料 | 第58页 |
| ·实验方法 | 第58-59页 |
| ·实验结果 | 第59-60页 |
| ·筛选所设计的引物及探针 | 第60-64页 |
| ·引言 | 第60页 |
| ·实验材料 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-62页 |
| ·实验结果 | 第62-63页 |
| ·结果分析 | 第63-64页 |
| ·针对HA-3号引物及探针优化反应条件 | 第64-70页 |
| ·引言 | 第64-65页 |
| ·实验材料 | 第65-66页 |
| ·实验方法 | 第66-68页 |
| ·实验结果 | 第68-69页 |
| ·结果分析 | 第69-70页 |
| ·检测HA-3号引物及探针的灵敏度 | 第70-74页 |
| ·引言 | 第70页 |
| ·实验材料 | 第70-71页 |
| ·实验方法 | 第71-72页 |
| ·实验结果 | 第72-73页 |
| ·结果分析 | 第73-74页 |
| ·检测HA-3号引物及探针的特异性 | 第74-77页 |
| ·引言 | 第74页 |
| ·实验材料 | 第74页 |
| ·实验方法 | 第74-76页 |
| ·实验结果 | 第76页 |
| ·结果分析 | 第76-77页 |
| ·临床样本验证HA-3号引物及探针 | 第77-80页 |
| ·引言 | 第77页 |
| ·实验材料 | 第77-78页 |
| ·实验方法 | 第78页 |
| ·实验结果 | 第78-79页 |
| ·结果分析 | 第79-80页 |
| 第三章 实验结论及分析 | 第80-83页 |
| 参考文献 | 第83-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 附录 | 第88-93页 |
| 附录A | 第88-89页 |
| 附录B | 第89-90页 |
| 附录C | 第90-93页 |
| 攻读硕士期间研究成果 | 第93-94页 |
