| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-33页 |
| ·人类Fas配体(hFasL) | 第14-18页 |
| ·hFasL的分子结构 | 第14-15页 |
| ·hFasL的体内分布 | 第15页 |
| ·hFasL与细胞凋亡 | 第15-16页 |
| ·hFasL的作用机理 | 第16-17页 |
| ·hFasL的医学价值及应用前景 | 第17-18页 |
| ·hFasL的重组生产 | 第18-29页 |
| ·膜结合形式hFasL和可溶性形式hFasL | 第18页 |
| ·hFasL重组生产的研究概况 | 第18-20页 |
| ·原核表达系统—大肠杆菌 | 第20-25页 |
| ·真核表达系统—盘基网柄菌 | 第25-29页 |
| ·基因工程生产hFasL存在的问题 | 第29页 |
| ·hFasL的分离纯化 | 第29-31页 |
| ·分离纯化重组蛋白的特点 | 第30页 |
| ·分离纯化重组蛋白的原则 | 第30页 |
| ·金属螯合亲和层析 | 第30-31页 |
| ·本课题内容及研究意义 | 第31-33页 |
| 第二章 hFasL表达载体pET32a(+)-FasL的构建 | 第33-46页 |
| ·材料 | 第33-34页 |
| ·菌株与质粒 | 第33页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第33页 |
| ·培养基及常用溶液的配制 | 第33-34页 |
| ·主要仪器设备 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-39页 |
| ·重组质粒pET32a(+)-hFasL的构建 | 第34-37页 |
| ·克隆菌株E.coli DH5α-pET32a-hFasL的获得 | 第37-38页 |
| ·表达菌株E.coli BL21(DE3)-pET32a-hFasL的获得 | 第38-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-45页 |
| ·重组质粒构建 | 第39-40页 |
| ·目的基因hFasL的扩增及鉴定 | 第40-42页 |
| ·克隆菌株E.coli DH5α-pET32a-hFasL的鉴定 | 第42-44页 |
| ·表达菌株E.coli BL21(DE3)-pET32a-hFasL的鉴定 | 第44-45页 |
| ·小结 | 第45-46页 |
| 第三章 可溶性hFasL在大肠杆菌中的表达及纯化 | 第46-62页 |
| ·材料 | 第46-47页 |
| ·菌株 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46页 |
| ·培养基及主要溶液的配制 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-54页 |
| ·重组大肠杆菌胞内外蛋白的提取 | 第47-48页 |
| ·重组hFasL的诱导表达 | 第48-49页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE电泳检测 | 第49-50页 |
| ·表达产物的免疫印迹(Western Blotting)分析 | 第50-51页 |
| ·hFasL浓度的测定 | 第51-52页 |
| ·目标蛋白的Ni-NTA亲和层析 | 第52-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-61页 |
| ·重组hFasL的可溶性鉴定 | 第54-55页 |
| ·重组hFasL最适诱导表达条件的确定 | 第55-59页 |
| ·亲和层析纯化重组hFasL | 第59-61页 |
| ·小结 | 第61-62页 |
| 第四章 可溶性hFasL在盘基网柄菌中的分泌表达及纯化 | 第62-77页 |
| ·材料 | 第62-66页 |
| ·菌株 | 第62-63页 |
| ·主要试剂 | 第63页 |
| ·培养基及主要溶液的配制 | 第63-66页 |
| ·实验方法 | 第66-71页 |
| ·重组盘基网柄菌AX3-FH的摇瓶培养 | 第66-67页 |
| ·重组盘基网柄菌AX3-FH的间歇发酵 | 第67页 |
| ·细胞密度的测定 | 第67页 |
| ·葡萄糖浓度的测定 | 第67-68页 |
| ·发酵液的处理 | 第68-69页 |
| ·目标蛋白的Ni-NTA亲和层析 | 第69-71页 |
| ·结果与分析 | 第71-75页 |
| ·重组盘基网柄菌AX3-FH的摇瓶培养 | 第71-72页 |
| ·重组盘基网柄菌AX3-FH的间歇发酵 | 第72-73页 |
| ·亲和层析纯化重组hFasL | 第73-75页 |
| ·小结 | 第75-77页 |
| 第五章 重组可溶性hFasL生物学活性的初步检测 | 第77-87页 |
| ·材料 | 第77页 |
| ·细胞株 | 第77页 |
| ·培养基及主要溶液的配制 | 第77页 |
| ·实验方法 | 第77-79页 |
| ·细胞培养 | 第77-78页 |
| ·MTT法最适条件的选择 | 第78-79页 |
| ·MTT法检测体外细胞存活率 | 第79页 |
| ·结果与分析 | 第79-86页 |
| ·MTT法最适条件的确定 | 第79-82页 |
| ·重组hFasL抑制肿瘤细胞生长的活性检测 | 第82-86页 |
| ·小结 | 第86-87页 |
| 第六章 结论与展望 | 第87-89页 |
| ·结论 | 第87-88页 |
| ·展望 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-97页 |
| 附录 | 第97-100页 |
| 在读期间发表论文 | 第100-101页 |
| 致谢 | 第101页 |
