猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及全基因组的测序与分析
| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略语表(ABBREVIATION) | 第9-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-25页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征 | 第11页 |
| ·PRRSV的危害及流行病学特点 | 第11-12页 |
| ·PRRSV的特性 | 第12-15页 |
| ·PRRSV的分类 | 第12页 |
| ·PRRSV的形态和理化特性 | 第12-13页 |
| ·PRRSV分离培养特性 | 第13-14页 |
| ·PRRSV的抗原性 | 第14页 |
| ·PRRSV的致病机理及生物学特性 | 第14-15页 |
| ·PRRSV基因组分子特征 | 第15-25页 |
| ·PRRSV基因组结构 | 第15-16页 |
| ·PRRSV的复制及基因的转录和表达 | 第16-17页 |
| ·PRRSV非编码区5′UTR和3′UTR | 第17-18页 |
| ·PRRSV的蛋白质 | 第18-23页 |
| ·PRRSV的基因组变异和RNA重组 | 第23-25页 |
| 第2章 研究目的与意义 | 第25-26页 |
| 第3章 材料与方法 | 第26-37页 |
| ·试验材料 | 第26-28页 |
| ·细胞与菌株 | 第26页 |
| ·载体与质粒 | 第26页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第26-27页 |
| ·培养基与抗生素及其配制 | 第27页 |
| ·主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第27-28页 |
| ·主要仪器设备 | 第28页 |
| ·试验方法 | 第28-37页 |
| ·病料采集与处理 | 第28页 |
| ·RT-PCR检测 | 第28-29页 |
| ·细胞的培养 | 第29-30页 |
| ·病毒的分离 | 第30页 |
| ·电镜观察 | 第30页 |
| ·TCID_(50)的测定 | 第30页 |
| ·微量中和试验 | 第30-31页 |
| ·全长扩增引物设计 | 第31页 |
| ·PRRSV RNA提取 | 第31-32页 |
| ·全基因的RT-PCR扩增 | 第32-33页 |
| ·PCR产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第33页 |
| ·PCR产物的回收 | 第33页 |
| ·DNA末端加A | 第33-34页 |
| ·DNA片段与T载体的连接 | 第34页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第34-35页 |
| ·连接产物的转化 | 第35页 |
| ·质粒的提取与鉴定 | 第35页 |
| ·质粒DNA的定量 | 第35-36页 |
| ·阳性克隆质粒的鉴定 | 第36页 |
| ·序列测定与拼接 | 第36页 |
| ·基因组基本结构分析 | 第36-37页 |
| 第4章 结果与分析 | 第37-57页 |
| ·病料的RT-PCR检测 | 第37页 |
| ·病料接种后的细胞病变 | 第37-38页 |
| ·电镜观察结果 | 第38-39页 |
| ·病毒TCID_(50)的测定 | 第39-40页 |
| ·中和试验结果 | 第40页 |
| ·PRRSV BJ株和GD株全基因组扩增 | 第40-41页 |
| ·全基因组片段克隆及序列拼接 | 第41页 |
| ·PRRSV BJ株和GD株全基因组结构组成分析 | 第41页 |
| ·不同PRRSV毒株间基因长度差异及同源性分析 | 第41-44页 |
| ·ORF1基因及编码的非结构蛋白分析 | 第44-45页 |
| ·ORF1基因序列同源性比较 | 第44页 |
| ·ORF1编码的非结构蛋白同源性比较 | 第44页 |
| ·NSP2区域变异分析 | 第44-45页 |
| ·结构蛋白的氨基酸序列同源性及其变异分析 | 第45-55页 |
| ·ORF2 | 第45-47页 |
| ·ORF3 | 第47-49页 |
| ·ORF4 | 第49-51页 |
| ·ORF5 | 第51-52页 |
| ·ORF6和ORF7 | 第52-55页 |
| ·毒力相关氨基酸的推测与变异分析 | 第55页 |
| ·核苷酸进化树绘制 | 第55-57页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第57-60页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| ·关于病毒的分离鉴定 | 第57页 |
| ·关于RNA提取和扩增 | 第57页 |
| ·关于PRRSV BJ株和GD株基因组的变异 | 第57-59页 |
| ·结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
