| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 插图和附表清单 | 第12-14页 |
| 縮略词 | 第14-16页 |
| 第一章 绪言 | 第16-36页 |
| ·酸性土壤的分布及铝的存在形态 | 第16页 |
| ·铝对植物的毒害 | 第16-17页 |
| ·植物耐铝毒的生理机制 | 第17-19页 |
| ·外部排斥机制 | 第17-19页 |
| ·有机酸的分泌 | 第17-18页 |
| ·根系其它分泌物的作用 | 第18页 |
| ·根际pH的升高 | 第18-19页 |
| ·细胞壁对铝的固定 | 第19页 |
| ·内部耐受机制 | 第19页 |
| ·植物耐铝毒的分子机制 | 第19-23页 |
| ·植物耐铝基因的分离与鉴定 | 第20页 |
| ·提高植物耐铝能力基因工程 | 第20-23页 |
| ·过量表达有机酸代谢相关酶 | 第22页 |
| ·过量表达有机酸通道蛋白 | 第22-23页 |
| ·过量表达抗氧化酶或其他铝胁迫响应基因 | 第23页 |
| ·大豆耐铝毒机制 | 第23-27页 |
| ·大豆耐铝毒的生理机制 | 第23-24页 |
| ·大豆耐铝毒的分子机制 | 第24-27页 |
| ·转运蛋白相关基因 | 第25页 |
| ·信号转导相关基因 | 第25-26页 |
| ·其它胁迫相关基因 | 第26-27页 |
| ·转录因子 | 第27-29页 |
| ·转录因子的结构特点 | 第27页 |
| ·转录因子的功能特点 | 第27-28页 |
| ·转录因子在植物抗逆性调控中的作用 | 第28-29页 |
| ·bHLH转录因子 | 第29-34页 |
| ·bHLH转录因子的结构特点 | 第29-30页 |
| ·bHLH转录因子的分类 | 第30-31页 |
| ·bHLH转录因子的生物学功能及作用机理 | 第31-34页 |
| ·参与植物生长发育和形态建成的调控 | 第31-32页 |
| ·参与植物次生代谢的调控 | 第32-33页 |
| ·参与植物的抗逆性的调控 | 第33-34页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第34-36页 |
| 第二章 材料与方法 | 第36-56页 |
| ·材料和方法 | 第36-40页 |
| ·植物材料 | 第36页 |
| ·菌株及质粒 | 第36-37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·主要仪器 | 第37-38页 |
| ·培养基和抗生素 | 第38-40页 |
| ·实验方法 | 第40-56页 |
| ·植物材料培养 | 第40-41页 |
| ·引物合成 | 第41页 |
| ·植物总RNA提取 | 第41-42页 |
| ·植物总RNA纯化 | 第42页 |
| ·第一链cDNA合成 | 第42页 |
| ·PCR扩增GmbHLH30基因 | 第42-43页 |
| ·DNA片段回收 | 第43-44页 |
| ·PCR产物的TA克隆 | 第44页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第44-45页 |
| ·质粒提取 | 第45页 |
| ·质粒酶切检测 | 第45-46页 |
| ·DNA片段的连接 | 第46页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第46页 |
| ·总蛋白的定量 | 第46-47页 |
| ·SDS-PAGE操作程序 | 第47-48页 |
| ·蛋白表达条件的优化 | 第48页 |
| ·蛋白His-Trap HP柱纯化方法 | 第48-49页 |
| ·包涵体蛋白的割胶纯化 | 第49-50页 |
| ·入门克隆载体pENTR2B-GmbHLH30的构建 | 第50页 |
| ·Gateway LR反应 | 第50页 |
| ·电击转化感受态农杆菌 | 第50-51页 |
| ·菌落PCR鉴定阳性农杆菌 | 第51页 |
| ·农杆菌侵染法转化烟草 | 第51-52页 |
| ·CTAB法提取烟草基因组 | 第52页 |
| ·植物总蛋白提取 | 第52页 |
| ·Western Blotting | 第52-53页 |
| ·烟草植株相对根伸长测定 | 第53-54页 |
| ·烟草植株中可溶性糖含量测定 | 第54页 |
| ·烟草植株中脯氨酸(Pro)含量测定 | 第54页 |
| ·烟草植株中丙二醛(MDA)含量测定 | 第54-55页 |
| ·烟草植株中过氧化氢(H_2O_2)含量测定 | 第55页 |
| ·烟草植株中蛋白质羰基(PC)含量测定 | 第55页 |
| ·数据统计分析 | 第55-56页 |
| 第三章 实验结果 | 第56-77页 |
| ·不同黑豆根中bHLH30基因表达谱分析 | 第56页 |
| ·GmbHLH30基因的扩增、TA克隆 | 第56-65页 |
| ·GmbHLH30基因的克隆 | 第56-58页 |
| ·pMD18T-GmbHLH30测序结果生物信息学分析 | 第58-65页 |
| ·测序得到的GmbHLH30序列拼接、ORF分析 | 第58-59页 |
| ·GmbHLH30同源性搜索、系统进化树分析 | 第59-61页 |
| ·GmbHLH30转录因子结构域分析 | 第61-65页 |
| ·原核表达载体构建与重组蛋白的表达纯化 | 第65-70页 |
| ·原核表达载体pET28a(+)-GmbHLH30的构建 | 第65-67页 |
| ·pET28a(+)-GmbHLH30测序结果分析 | 第67-68页 |
| ·GmbHLH30重组蛋白的表达纯化 | 第68-70页 |
| ·GmbHLH30抗体效价评价 | 第70页 |
| ·植物表达载体构建与烟草遗传转化 | 第70-73页 |
| ·入门载体pENTR2B-GmbHLH30的构建 | 第70-72页 |
| ·pENTR2B-GmbHLH30测序结果分析 | 第72页 |
| ·植物表达载体pK2-35S-GmbHLH30的构建与烟草遗传转化 | 第72-73页 |
| ·转GmbHLH30基因烟草分子生物学检测 | 第73-75页 |
| ·转GmbHLH30基因烟草基因组水平检测 | 第73页 |
| ·转GmbHLH30基因烟草转录水平检测 | 第73页 |
| ·转GmbHLH30基因烟草蛋白质水平检测 | 第73-75页 |
| ·转GmbHLH30基因烟草生理特性分析 | 第75-77页 |
| ·铝胁迫对转GmbHLH30基因烟草相对根伸长的影响 | 第75页 |
| ·铝胁迫对转GmbHLH30基因烟草可溶性糖、脯氨酸含量的影响 | 第75页 |
| ·铝胁迫对转GmbHLH30基因烟草膜脂过氧化水平的影响 | 第75-77页 |
| 第四章 讨论 | 第77-79页 |
| 第五章 总结及展望 | 第79-82页 |
| ·总结 | 第79-81页 |
| ·展望 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-94页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第94页 |
