| 目录 | 第1-6页 |
| 英文缩写词 | 第6-9页 |
| 中文摘要 | 第9-13页 |
| 第一部分 食管鳞癌甲基化谱及其作为肿瘤标志物的研究 | 第9-10页 |
| 第二部分 分泌型卷曲相关蛋白家族基因(SFRPs)甲基化与食管鳞癌相关性研究 | 第10-11页 |
| 第三部分 食管鳞癌全基因组等位基因表达谱研究 | 第11-12页 |
| 论文创新点 | 第12-13页 |
| ABSTRACT | 第13-18页 |
| Part Ⅰ | 第13-14页 |
| Part Ⅱ | 第14-16页 |
| Part Ⅲ | 第16-18页 |
| 第一部分 食管鳞癌甲基化谱及其作为肿瘤标志物的研究 | 第18-70页 |
| ·前言 | 第18-19页 |
| ·材料 | 第19-24页 |
| ·临床组织和血标本 | 第19-20页 |
| ·菌株和质粒 | 第20页 |
| ·主要酶、生化试剂及溶液配制 | 第20-23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-39页 |
| ·引物和探针的设计和合成 | 第24-27页 |
| ·SssI修饰DNA的制备 | 第27-28页 |
| ·组织基因组DNA和血清游离DNA的提取 | 第28-29页 |
| ·DNA的亚硫酸钠修饰 | 第29-31页 |
| ·甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP) | 第31页 |
| ·MSP产物回收和纯化 | 第31-32页 |
| ·MSP产物的克隆 | 第32页 |
| ·阳性克隆重组体的筛选与鉴定 | 第32-34页 |
| ·亚硫酸盐测序 | 第34页 |
| ·组织总RNA的提取 | 第34-35页 |
| ·总RNA的反转录和荧光定量PCR | 第35-36页 |
| ·免疫组织化学 | 第36-37页 |
| ·荧光定量甲基化特异性PCR(MethyLight Analysis) | 第37-38页 |
| ·统计分析方法 | 第38-39页 |
| ·实验结果 | 第39-61页 |
| ·研究对象的临床病理参数 | 第39-40页 |
| ·基因组DNA亚硫酸钠修饰后质量评价 | 第40页 |
| ·食管鳞癌中肿瘤相关基因的甲基化谱分析 | 第40-42页 |
| ·MSP产物的克隆及亚硫酸盐测序分析 | 第42-46页 |
| ·食管鳞癌甲基化谱与临床病理参数相关性分析 | 第46-47页 |
| ·食管鳞癌组织中DNMT3b的高表达 | 第47-54页 |
| ·食管鳞癌组织中DNMTs表达与临床病理参数相关性分析 | 第54-55页 |
| ·食管鳞癌组织中多基因甲基化与DNMTs表达相关性分析 | 第55-57页 |
| ·血清游离DNA多基因的甲基化分析 | 第57-59页 |
| ·血清游离DNA多基因甲基化作为肿瘤标志物的诊断价值分析 | 第59-60页 |
| ·血清DNA多基因甲基化与临床病理参数相关性分析 | 第60-61页 |
| ·讨论 | 第61-65页 |
| ·参考文献 | 第65-70页 |
| 第二部分 分泌型卷曲相关蛋白家族基因(SFRPs)甲基化与食管鳞癌相关性研究 | 第70-102页 |
| ·前言 | 第70-71页 |
| ·材料 | 第71-73页 |
| ·临床组织标本 | 第71页 |
| ·实验细胞株 | 第71-72页 |
| ·菌株和质粒 | 第72页 |
| ·细胞培养试剂及材料 | 第72页 |
| ·主要酶、生化试剂及溶液配制 | 第72-73页 |
| ·主要仪器设备 | 第73页 |
| ·方法 | 第73-80页 |
| ·SFRPs基因启动子CpG岛预测 | 第73页 |
| ·引物的设计和合成 | 第73-74页 |
| ·SssI修饰DNA的制备 | 第74页 |
| ·人食管鳞癌细胞系培养 | 第74-75页 |
| ·细胞系去甲基化药物(DAC)和组蛋白去乙酰化抑制剂(TSA)处理 | 第75-76页 |
| ·组织和细胞基因组DNA的提取 | 第76-77页 |
| ·DNA的亚硫酸钠修饰 | 第77页 |
| ·甲基化特异性PCR(MSP) | 第77页 |
| ·组织和细胞系总RNA的提取 | 第77-78页 |
| ·总RNA的反转录和荧光定量PCR | 第78-79页 |
| ·亚硫酸盐基因组测序 | 第79-80页 |
| ·统计分析方法 | 第80页 |
| ·实验结果 | 第80-95页 |
| ·研究对象的临床病理参数 | 第80页 |
| ·基因组DNA亚硫酸钠修饰后质量评价 | 第80页 |
| ·食管鳞癌中SFRPs家族基因的甲基化分析 | 第80-81页 |
| ·食管鳞癌中SFRPs甲基化与临床病理参数相关性分析 | 第81-85页 |
| ·食管鳞癌中SFRPs甲基化与DNMTs表达相关性分析 | 第85页 |
| ·食管鳞癌中SFRPs基因的mRNA表达分析 | 第85-88页 |
| ·SFRPs的mRNA表达与临床病理参数相关性分析 | 第88-90页 |
| ·去甲基化药物(DAC)和组蛋白去乙酰化抑制剂(TSA)逆转SFRPs的表达 | 第90-92页 |
| ·SFRPs启动子区CpG岛亚硫酸盐测序分析 | 第92-95页 |
| ·讨论 | 第95-98页 |
| ·参考文献 | 第98-102页 |
| 第三部分 食管鳞癌全基因组等位基因表达潜研究 | 第102-128页 |
| ·前言 | 第102-103页 |
| ·材料 | 第103-105页 |
| ·临床组织和外周血标本 | 第103页 |
| ·芯片 | 第103页 |
| ·主要酶、生化试剂及溶液配制 | 第103-104页 |
| ·主要仪器设备 | 第104-105页 |
| ·方法 | 第105-111页 |
| ·外周血基因组DNA的提取 | 第105页 |
| ·组织总RNA的提取及质量评价 | 第105页 |
| ·DNA混合池的建立 | 第105-106页 |
| ·RNA混合池的建立及双链DNA的合成 | 第106-107页 |
| ·芯片杂交 | 第107-111页 |
| ·统计分析方法 | 第111页 |
| ·实验结果 | 第111-121页 |
| ·总RNA质量的评价 | 第111页 |
| ·表达与不表达等位基因的定义 | 第111-112页 |
| ·食管鳞癌与癌旁正常组织的杂合子位点全基因组表达模式 | 第112-113页 |
| ·等位基因表达差异与启动子甲基化关系分析 | 第113-115页 |
| ·全基因组等位基因位点表达差异与ASE差异的关系分析 | 第115-119页 |
| ·食管鳞癌中表达下调基因群的富集分析 | 第119-121页 |
| ·讨论 | 第121-124页 |
| ·参考文献 | 第124-128页 |
| 文献综述 | 第128-147页 |
| 参考文献 | 第140-147页 |
| 致谢 | 第147-148页 |
| 博士期间发表和撰写的学术论文和会议摘要 | 第148-149页 |
