| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 hBrd4 BD2溶液结构与功能的研究 | 第12-92页 |
| 第一部分 综述 | 第12-30页 |
| 1.组蛋白密码 | 第12页 |
| 2.组蛋白乙酰化和bromodomain | 第12-15页 |
| 3.Brd4蛋白的功能 | 第15-28页 |
| ·Brd4和BET家族蛋白 | 第15-17页 |
| ·Brd4与P-TEFb | 第17-21页 |
| ·Brd4与RFC | 第21-23页 |
| ·Brd4与SPA-1 | 第23-25页 |
| ·Brd4与mediator复合物 | 第25页 |
| ·Brd4与一些病毒 | 第25-28页 |
| 4.研究Brd4及其bromodomain的意义 | 第28-30页 |
| 第二部分 材料和方法 | 第30-56页 |
| 1.蛋白基因的克隆 | 第30-35页 |
| ·PCR获取目标基因 | 第30-32页 |
| ·PCR实验引物的设计 | 第30-31页 |
| ·PCR实验参数 | 第31页 |
| ·用1%琼脂糖核酸电泳检测PCR结果 | 第31-32页 |
| ·PCR产物的回收 | 第32页 |
| ·表达质粒的构建 | 第32-35页 |
| ·目的基因片段连入T载体并扩增 | 第32-33页 |
| ·T载体质粒的双酶切 | 第33-34页 |
| ·目标基因连入表达载体中 | 第34-35页 |
| 2.目的蛋白的诱导表达与纯化 | 第35-37页 |
| 3.目的蛋白的稳定性研究 | 第37-38页 |
| 4.蛋白浓度的测定 | 第38页 |
| 5.NMR波谱解析Brd4 BD2蛋白的三维溶液空间结构 | 第38-52页 |
| ·~(15)N-标记和~(15)N,~(13)C-双标记蛋白质样品的制备 | 第38-39页 |
| ·NMR实验与数据变换 | 第39-41页 |
| ·NMR实验 | 第39-40页 |
| ·核磁共振实验数据处理 | 第40-41页 |
| ·主链顺序认证及侧链原子化学位移认证 | 第41-45页 |
| ·主链顺序认证 | 第43-45页 |
| ·侧链原子化学位移认证 | 第45页 |
| ·二级结构的确定 | 第45-46页 |
| ·三级结构的计算 | 第46-52页 |
| ·距离几何计算 | 第48-50页 |
| ·结构优化 | 第50-52页 |
| 6.化学位移干扰实验 | 第52-53页 |
| 7.Brd4 BD2突变体的制备 | 第53页 |
| 8.FPLC液相色谱 | 第53-54页 |
| 9.沉降速率分析 | 第54页 |
| 10.Brd4 BD2与H4-AcK5/K12复合物模型的计算 | 第54页 |
| 11.弛豫实验 | 第54-55页 |
| 12.简化的谱密度函数mapping | 第55-56页 |
| 第三部分 结果和讨论 | 第56-86页 |
| 1.成功构建了27个重组质粒 | 第56-57页 |
| 2.Brd4 BD1、Brd4 BD2、Brd4 BD2(E)、Brd4(49-457)和CyclinT1(426)·蛋白的表达和纯化 | 第57-58页 |
| 3.Brd4 BD2的化学位移认证 | 第58-60页 |
| 4.Brd4 BD2的二级结构分析 | 第60-63页 |
| 5.Brd4 BD2的氢氘交换实验 | 第63页 |
| 6.Brd4 BD2的溶液结构解析 | 第63-64页 |
| 7.Brd4 BD2的溶液结构描述 | 第64-66页 |
| 8.Brd4 BD2与其它bromodomain的序列和结构比较分析 | 第66-68页 |
| 9.Brd4 BD2与来自乙酰化组蛋白H4和H3小肽的相互作用 | 第68-74页 |
| 10.Brd4 BD2突变结果分析 | 第74-76页 |
| 11.Brd4 BD1和BD2在溶液中主要以单体形式存在 | 第76-80页 |
| 12.两分子的Brd4 BD2与一分子H4-AcK5/K12形成的三元复合物模型 | 第80页 |
| 13.Brd4 BD2主链的动力学性质 | 第80-83页 |
| 14.检测不到Brd4 BD1、BD2、BD2(E)与CyclinT1(426-516)有特异性的相互作用 | 第83-86页 |
| 参考文献 | 第86-92页 |
| 第二章 hMog1的溶液结构及其与hRan相互作用的研究 | 第92-129页 |
| 第一部分 综述 | 第92-110页 |
| 1.Mog1通过与Ran的相互作用参与核质转运系统 | 第92-106页 |
| ·Ran及其相关蛋白质 | 第92-96页 |
| ·Ran调控下的核质转运系统 | 第96-104页 |
| ·Mog1与Ran的相互作用 | 第104-106页 |
| 2.Mog1参与SLN1-SKN7信号传导 | 第106-108页 |
| 3.Mog1的其它功能 | 第108-110页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第110-115页 |
| 1.hMog1和Ran蛋白的克隆 | 第110页 |
| 2.蛋白质的表达与纯化 | 第110-111页 |
| ·hMog1的表达与纯化 | 第110-111页 |
| ·hRan的表达与纯化 | 第111页 |
| 3.NMR波谱解析hMog1的三维溶液空间结构 | 第111-113页 |
| ·核磁实验 | 第111-112页 |
| ·结构计算 | 第112-113页 |
| 4.主链弛豫实验 | 第113-114页 |
| 5.FPLC液相色谱 | 第114页 |
| 6.等温滴定微量热实验(ITC) | 第114-115页 |
| 第三部分 结果和讨论 | 第115-124页 |
| 1.hMog1蛋白的纯化 | 第115页 |
| 2.hMog1的溶液结构 | 第115-118页 |
| 3.hMog1与其它同源蛋白的序列和结构比对 | 第118-119页 |
| 4.hMog1蛋白的主链动力学 | 第119-120页 |
| 5.hMog1与hRan·GDP相互作用的研究 | 第120-122页 |
| ·FPLC液相色谱分析 | 第120页 |
| ·等温量热滴定 | 第120-121页 |
| ·核磁滴定 | 第121-122页 |
| 6.Mog1中的脯氨酸顺反异构化不能被PPIL1催化 | 第122-124页 |
| 参考文献 | 第124-129页 |
| 致谢 | 第129-130页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的研究成果 | 第130页 |
