| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 引言 | 第14-29页 |
| 1 禽流感概述 | 第14-18页 |
| ·禽流感的发生与流行 | 第14-15页 |
| ·禽流感病毒分子生物学研究进展 | 第15-18页 |
| ·禽流感病毒的基因组结构及编码蛋白功能 | 第15-16页 |
| ·禽流感病毒的复制 | 第16-17页 |
| ·禽流感病毒的遗传与变异 | 第17-18页 |
| ·禽流感的免疫预防 | 第18页 |
| 2 RNAi 研究进展 | 第18-23页 |
| ·RNAi 的发现 | 第18-19页 |
| ·RNAi 的分子作用机制 | 第19-20页 |
| ·dsRNA 的产生 | 第19页 |
| ·RNAi 的起始阶段：dsRNA 被加工成siRNA | 第19页 |
| ·RNAi 的持续阶段或放大阶段 | 第19-20页 |
| ·RNAi 的效应阶段 | 第20页 |
| ·RNAi 技术的应用 | 第20-21页 |
| ·基因治疗 | 第20页 |
| ·新药物的研究和开发 | 第20页 |
| ·基因功能分析 | 第20-21页 |
| ·miRNA、siRNA 与RNAi | 第21-22页 |
| ·RNAi 的抗流感病毒研究 | 第22-23页 |
| 3 转基因动物研究的概况 | 第23-28页 |
| ·常用转基因技术 | 第24-25页 |
| ·显微注射法 | 第24页 |
| ·逆转录病毒感染法 | 第24页 |
| ·精子载体法 | 第24页 |
| ·胚胎干细胞介导法 | 第24-25页 |
| ·人工酵母染色体法 | 第25页 |
| ·电转移法 | 第25页 |
| ·转基因动物的应用 | 第25-27页 |
| ·动物抗病育种 | 第25-26页 |
| ·建立诊断和治疗人类疾病的动物模型 | 第26页 |
| ·生物反应器 | 第26-27页 |
| ·其他用途 | 第27页 |
| ·RNAi 在转基因动物中的应用 | 第27-28页 |
| 4 研究的目的和意义 | 第28-29页 |
| 实验一 靶向P82 基因的特异性SIRNA 抑制禽流感病毒复制 | 第29-35页 |
| 1 材料与方法 | 第29-31页 |
| ·病毒与细胞 | 第29页 |
| ·试剂 | 第29-30页 |
| ·引物 | 第30页 |
| ·siRNA 设计与合成 | 第30页 |
| ·siRNA 转染与AIV 接种 | 第30页 |
| ·HA 试验测定血凝价 | 第30页 |
| ·Real-time PCR 试验检测P82 转录基因拷贝数 | 第30-31页 |
| ·标准品的制备及标准曲线的建立 | 第30-31页 |
| ·Real-time PCR 定量 | 第31页 |
| 2 结果 | 第31-32页 |
| ·HA 试验结果 | 第31页 |
| ·Real-time PCR 定量结果 | 第31-32页 |
| ·标准曲线的建立 | 第31-32页 |
| ·Real-time PCR 定量 | 第32页 |
| 3 讨论 | 第32-35页 |
| 实验二 多靶点串联MIRNA 表达载体的构建及其抑制禽流感病毒复制的研究 | 第35-43页 |
| 1 材料与方法 | 第35-38页 |
| ·病毒与细胞 | 第35-36页 |
| ·试剂 | 第36页 |
| ·引物 | 第36页 |
| ·miRNA 编码序列的设计与合成 | 第36页 |
| ·miRNA 单个及串联表达载体的构建与鉴定 | 第36-37页 |
| ·细胞培养、重组质粒的转染与禽流感病毒接种 | 第37页 |
| ·HA 测定血凝价 | 第37页 |
| ·Real-time PCR 试验检测抑制效果 | 第37-38页 |
| ·标准品的制备及标准曲线的建立 | 第37-38页 |
| ·Real-time PCR 定量 | 第38页 |
| 2 结果 | 第38-41页 |
| ·重组质粒鉴定结果 | 第38-39页 |
| ·HA 实验结果 | 第39-40页 |
| ·Real-time PCR 定量结果 | 第40-41页 |
| ·标准曲线的建立 | 第40页 |
| ·Real-time PCR 定量 | 第40-41页 |
| 3 讨论 | 第41-43页 |
| 实验三 表达抗AIV 多靶点MIRNA 转基因鼠的制备与鉴定 | 第43-52页 |
| 1 材料与方法 | 第44-46页 |
| ·实验用质粒与动物 | 第44页 |
| ·试剂与仪器设备 | 第44页 |
| ·引物 | 第44页 |
| ·显微注射用片段的准备与转基因鼠的制备 | 第44-45页 |
| ·G0 代转基因鼠的PCR 鉴定 | 第45页 |
| ·G0 代转基因鼠的Southern blot 检测 | 第45页 |
| ·F1 代转基因鼠的获得和检测 | 第45页 |
| ·转基因鼠的RT-PCR 检测 | 第45页 |
| ·GFP 表达的检测 | 第45-46页 |
| 2 结果 | 第46-49页 |
| ·转基因鼠的制备 | 第46页 |
| ·PCR 检测阳性G0 代鼠 | 第46页 |
| ·G0 代转基因鼠的Southern blot 检测 | 第46页 |
| ·F1 代转基因鼠的获得及转基因整合分析 | 第46-47页 |
| ·转基因鼠的RT-PCR 检测结果 | 第47-48页 |
| ·GFP 表达检测 | 第48-49页 |
| 3 讨论 | 第49-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62页 |
