| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩写词 | 第11-12页 |
| 引言 | 第12-18页 |
| 1 研究背景 | 第12页 |
| 2 植物胚胎发育相关基因的研究进展 | 第12-15页 |
| ·概述 | 第12-14页 |
| ·植物黄烷酮-3-羟化酶(flavanone 3-hydroxylase,F3H)基因的研究 | 第14-15页 |
| ·植物果糖激酶(Fructokinase,FRK)基因的研究 | 第15页 |
| 3 RACE的研究及其在植物基因克隆上的应用 | 第15-17页 |
| ·RACE原理 | 第15-16页 |
| ·RACE技术的优点 | 第16页 |
| ·RACE在植物基因克隆上的应用 | 第16-17页 |
| 4 研究展望 | 第17-18页 |
| 第一章 龙眼胚胎F3H基因cDNA全长的克隆 | 第18-35页 |
| 1 材料与方法 | 第18-24页 |
| ·材料 | 第18页 |
| ·仪器与试剂 | 第18-19页 |
| ·引物合成与测序 | 第19页 |
| ·龙眼胚胎总RNA的提取与纯化 | 第19-20页 |
| ·龙眼胚胎总RNA的提取 | 第19页 |
| ·龙眼胚胎总RNA的纯化 | 第19-20页 |
| ·龙眼胚胎F3H保守区的克隆 | 第20-22页 |
| ·引物设计 | 第20页 |
| ·cDNA的合成 | 第20-21页 |
| ·RT-PCR | 第21页 |
| ·目的片段的回收纯化 | 第21页 |
| ·目的片段与T载体连接、转化及鉴定 | 第21-22页 |
| ·3′RACE | 第22-23页 |
| ·3′RACE引物设计 | 第22页 |
| ·3′-RACE-Ready cDNA的合成 | 第22-23页 |
| ·3′末端的PCR扩增 | 第23页 |
| ·目的片段的回收纯化 同本章1.5.4的方法 | 第23页 |
| ·目的片段与T载体连接、转化及鉴定 同本章1.5.5的方法 | 第23页 |
| ·5′RACE | 第23-24页 |
| ·5′RACE引物设计 | 第23页 |
| ·5′-RACE-Ready DNA的合成 | 第23-24页 |
| ·5′末端的PCR扩增 | 第24页 |
| ·目的片段的回收纯化同本章1.5.4的方法 | 第24页 |
| ·目的片段与T载体连接、转化及鉴定 同本章1.5.5的方法 | 第24页 |
| 2 结果与分析 | 第24-34页 |
| ·龙眼胚胎总RNA的提取与纯度检测 | 第25页 |
| ·龙眼胚胎F3H基因cDNA的RT-PCR扩增 | 第25-27页 |
| ·龙眼胚胎F3H基因cDNA 3′RACE扩增 | 第27-28页 |
| ·龙眼胚胎F3H基因5′RACE扩增 | 第28-29页 |
| ·龙眼胚胎F3H基因cDNA全长序列分析 | 第29-30页 |
| ·龙眼胚胎F3H基因cDNA序列及其编码产物的同源性分析 | 第30-32页 |
| ·龙眼胚胎F3H蛋白结构分析 | 第32-34页 |
| 3 讨论 | 第34-35页 |
| 第二章 龙眼F3H基因的原核表达 | 第35-45页 |
| 1 材料与方法 | 第35-40页 |
| ·酶及试剂 | 第35页 |
| ·菌种与表达载体 | 第35页 |
| ·引物合成与测序 | 第35页 |
| ·F3H cDNA全开放阅读框的克隆 | 第35-36页 |
| ·表达载体pET29a-F3H的构建 | 第36-40页 |
| ·质粒DNA提取 | 第36页 |
| ·pET29a载体和F3H-T Easy重组质粒的双酶切 | 第36-37页 |
| ·连接载体片断和目的基因片断 | 第37页 |
| ·连接产物的转化 | 第37页 |
| ·重组质粒的检测 | 第37-38页 |
| ·制备大肠杆菌BL21感受态细胞及连接产物的转化、筛选及重组质粒鉴定 | 第38页 |
| ·目的基因的诱导表达及蛋白质样品制备 | 第38-39页 |
| ·目的基因表达的检测 | 第39-40页 |
| 2 结果与分析 | 第40-44页 |
| ·表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·表达产物的检测 | 第41-44页 |
| 3 讨论 | 第44-45页 |
| 第三章 龙眼胚胎FRK基因的cDNA克隆 | 第45-52页 |
| 1 材料与方法 | 第45-47页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·仪器与试剂 | 第45页 |
| ·引物合成与测序 | 第45页 |
| ·龙眼胚胎总RNA的提取 | 第45页 |
| ·龙眼胚胎FRK保守区的克隆 | 第45-46页 |
| ·引物设计 | 第45页 |
| ·cDNA的合成 | 第45页 |
| ·RT-PCR | 第45-46页 |
| ·目的片段的回收纯化 | 第46页 |
| ·目的片段与T载体连接、转化及鉴定 | 第46页 |
| ·3′RACE | 第46-47页 |
| ·3′RACE引物设计 | 第46页 |
| ·3′-RACE-Ready cDNA的合成 | 第46页 |
| ·3′末端的PCR扩增 | 第46-47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-51页 |
| ·龙眼胚胎FRK基因cDNA的RT-PCR扩增 | 第47-48页 |
| ·龙眼胚胎FRK基因cDNA 3′RACE扩增 | 第48-51页 |
| 3 讨论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
