凡纳滨对虾桃拉综合征病毒主要结构蛋白基因的克隆及原核表达
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1.前言 | 第10-20页 |
| ·对虾的主要疾病 | 第10页 |
| ·对虾的几种主要病毒 | 第10-13页 |
| ·桃拉病毒概述 | 第13-19页 |
| ·桃拉病毒的发现 | 第13页 |
| ·桃拉病毒的地理分布及传播 | 第13-14页 |
| ·桃拉病毒的分类及基因结构 | 第14-15页 |
| ·桃拉病毒的宿主范围、年龄和其它感染因素 | 第15-16页 |
| ·桃拉病毒感染的外部症状 | 第16页 |
| ·诊断方法 | 第16-19页 |
| ·组织学方法 | 第16-17页 |
| ·指示生物测定法 | 第17-18页 |
| ·原位杂交法 | 第18-19页 |
| ·RT-PCR方法 | 第19页 |
| ·本研究的目的 | 第19-20页 |
| 2.材料与方法 | 第20-33页 |
| ·材料、试剂 | 第20-22页 |
| ·菌株和质粒 | 第20页 |
| ·动物材料 | 第20页 |
| ·主要化学试剂及仪器 | 第20-22页 |
| ·方法 | 第22-33页 |
| ·病料采集 | 第22页 |
| ·总RNA的提取 | 第22-23页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第23页 |
| ·引物设计及合成 | 第23页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第23-24页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物(酶切片段) | 第24-25页 |
| ·PCR产物(酶切片段)的纯化 | 第25页 |
| ·DNA连接反应(TA克隆) | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第26页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第26页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第26-27页 |
| ·质粒的小量提取 | 第27页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第27页 |
| ·原核表达载体在大肠杆菌中的诱导表达 | 第27-28页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第28-29页 |
| ·表达产物的可融性分析 | 第29页 |
| ·包涵体的复性 | 第29页 |
| ·纯化分离表达蛋白 | 第29-30页 |
| ·免疫小鼠 | 第30-31页 |
| ·血清处理方法 | 第31页 |
| ·抗血清效价检测 | 第31页 |
| ·Western免疫印迹反应 | 第31-32页 |
| ·Dot-Elisa检测 | 第32-33页 |
| 3.实验结果 | 第33-47页 |
| ·RT-PCR扩增vp1、vp2、vp3基因 | 第33-34页 |
| ·vp1、vp2、vp3基因测序 | 第34-38页 |
| ·vp1、vp2、vp3基因的序列分析 | 第38-40页 |
| ·vp1、vp2、vp3基因的TA克隆及鉴定 | 第40-42页 |
| ·原核表达载体的构建及鉴定 | 第42页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第42-44页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第44页 |
| ·抗血清效价检测 | 第44页 |
| ·Western免疫印迹反应 | 第44-45页 |
| ·Dot-Elisa检测 | 第45-47页 |
| 4.讨论 | 第47-49页 |
| ·病料采集 | 第47页 |
| ·序列分析 | 第47页 |
| ·载体选择 | 第47-48页 |
| ·蛋白表达条件、蛋白纯化及复性的条件优化 | 第48页 |
| ·蛋白分子量的差异 | 第48-49页 |
| ·后续研究展望 | 第49页 |
| 5.小结 | 第49-50页 |
| 6.参考文献 | 第50-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
