| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 引言 | 第9-12页 |
| 2 材料与方法 | 第12-25页 |
| ·试验材料 | 第12-13页 |
| ·菌株与载体 | 第12页 |
| ·供试杂草 | 第12页 |
| ·供试培养基 | 第12页 |
| ·试剂 | 第12页 |
| ·主要仪器和设备 | 第12-13页 |
| ·方法 | 第13-25页 |
| ·灰葡萄孢BC4菌株基因组DNA的提取 | 第13页 |
| ·Genomic Walking技术扩增CaMK基因DNA序列 | 第13-16页 |
| ·RT-PCR技术克隆CaMK基因的cDNA全长 | 第16-18页 |
| ·CaMK基因的生物信息学分析 | 第18页 |
| ·基因的拷贝数分析 | 第18-20页 |
| ·灰葡萄孢CaMK基因的原核表达 | 第20-23页 |
| ·CaMK特异性抑制剂KN-62分析 | 第23-25页 |
| 3 结果与分析 | 第25-48页 |
| ·基因组DNA和总RNA的提取及cDNA的合成 | 第25页 |
| ·Genomic Walking技术扩增CaMK基因DNA序列 | 第25-31页 |
| ·CaMK基因694 bp片段的5'端Genomic Walking扩增 | 第25-26页 |
| ·694 bp基因片段的5'端Genomic Walking产物的回收、克隆、测序与拼接 | 第26页 |
| ·CaMK基因694 bp片段的3'端Genomic Walking扩增 | 第26-27页 |
| ·694 bp基因片段的3'端Genomic Walking产物的回收、克隆、测序与拼接 | 第27页 |
| ·CaMK基因2292 bp片段的5'端Genomic Walking扩增 | 第27-28页 |
| ·2292 bp基因片段的5'端Genomic Walking产物的回收、克隆、测序与拼接 | 第28页 |
| ·CaMK基因2292 bp片段的3'端Genomic Walking扩增 | 第28-29页 |
| ·2292 bp基因片段的3'端Genomic Walking产物的回收、克隆、测序与拼接 | 第29-31页 |
| ·RT-PCR技术克隆CaMK基因的cDNA全长 | 第31-32页 |
| ·CaMK基因的RT-PCR扩增 | 第31页 |
| ·RT-PCR扩增产物的回收、克隆、测序 | 第31-32页 |
| ·灰葡萄孢CaMK基因的外显子和内含子分析 | 第32-37页 |
| ·CaMK基因的生物信息学分析 | 第37-40页 |
| ·CaMK的同源性分析及蛋白性质预测 | 第37页 |
| ·CaMK的保守结构域分析 | 第37-38页 |
| ·二级结构预测与三维模型构建 | 第38页 |
| ·启动子分析 | 第38-40页 |
| ·CaMK基因的拷贝数分析 | 第40-41页 |
| ·探针的制备 | 第40页 |
| ·Southern杂交 | 第40-41页 |
| ·灰葡萄孢CaMK基因的原核表达 | 第41-45页 |
| ·带有双酶切位点的CaMK基因的PCR扩增 | 第41页 |
| ·重组载体PMD19-CaMK的PCR和双酶切检测 | 第41-42页 |
| ·载体pET-28a(+)的酶切验证 | 第42-43页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-CaMK的酶切检测 | 第43页 |
| ·目的蛋白的表达 | 第43-44页 |
| ·表达蛋白的Western Blot分析 | 第44-45页 |
| ·CaMK特异性抑制剂KN-62分析 | 第45-48页 |
| ·KN-62对灰葡萄孢孢子萌发的抑制作用 | 第45-46页 |
| ·KN-62对灰葡萄孢致病性的影响 | 第46-47页 |
| ·KN-62对灰葡萄孢毒素的除草活性的影响 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第56-57页 |
| 作者简历 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
