| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 缩略语表 | 第14-15页 |
| 第一部分 文献综述 卵泡抑制素对牛卵泡发育和体外受精及胚胎发育的作用研究进展 | 第15-37页 |
| 1 激素作用方法学研究进展 | 第15-25页 |
| ·提供外源激素 | 第16-18页 |
| ·注射激素 | 第16页 |
| ·激素基因治疗 | 第16-17页 |
| ·器官移植 | 第17页 |
| ·刺激合成 | 第17-18页 |
| ·去除内源激素法 | 第18-23页 |
| ·摘除分泌器官 | 第18页 |
| ·基因敲除 | 第18-19页 |
| ·基因免疫 | 第19-20页 |
| ·激素免疫 | 第20-21页 |
| ·RNAi | 第21-22页 |
| ·阻断受体 | 第22页 |
| ·抑制合成 | 第22-23页 |
| ·用基因治疗法研究卵泡发育的意义 | 第23-25页 |
| 2 卵泡抑制素对牛卵泡发育的作用研究进展 | 第25-32页 |
| ·卵泡抑制素对牛卵泡发育的局部调节作用 | 第25-29页 |
| ·抑制素的结构和特性 | 第25-26页 |
| ·抑制素亚单位在卵巢内的表达及作用 | 第26-29页 |
| ·卵泡抑制素对FSH分泌的作用 | 第29-30页 |
| ·卵泡抑制素与其他激素的相互关系 | 第30-32页 |
| ·卵泡抑制素与激活素的关系 | 第30-31页 |
| ·卵泡抑制素与类固醇激素的关系 | 第31-32页 |
| ·卵泡抑制素与卵泡抑素的关系 | 第32页 |
| ·卵泡抑制素对LH分泌的影响 | 第32页 |
| 3 卵泡抑制素对牛卵母细胞体外成熟的调控研究进展 | 第32-35页 |
| ·卵母细胞成熟的调节机理 | 第32-33页 |
| ·卵泡抑制素对牛卵母细胞体外成熟的调控 | 第33-35页 |
| 4 卵泡抑制素对牛卵母细胞体外受精及胚胎发育的作用研究进展 | 第35-37页 |
| ·体内研究 | 第35-36页 |
| ·体外研究 | 第36-37页 |
| 第二部分 试验研究 | 第37-82页 |
| 1 卵泡抑制素基因转染对卵泡颗粒细胞增殖、凋亡、激素分泌及共培养的卵母细胞和胚胎发育的影响 | 第37-59页 |
| ·前言 | 第37-38页 |
| ·材料和方法 | 第38-46页 |
| ·材料 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-46页 |
| ·质粒的鉴定与制备 | 第38-42页 |
| ·牛卵泡GCs的分离和培养 | 第42页 |
| ·抑制素基因重组质粒pEGISI转染GCs步骤 | 第42-44页 |
| ·细胞增殖的检测 | 第44页 |
| ·Annexin V/FITC染色法检测细胞凋亡 | 第44-45页 |
| ·培养液的采集和激素测定 | 第45页 |
| ·牛卵母细胞获取和成熟培养 | 第45页 |
| ·卵母细胞的成熟鉴定 | 第45-46页 |
| ·体外受精 | 第46页 |
| ·体外胚胎培养 | 第46页 |
| ·统计分析 | 第46页 |
| ·试验结果 | 第46-54页 |
| ·pEGISI质粒提取后的酶切鉴定 | 第46-47页 |
| ·脂质体介导的pEGISI基因转染GCs的鉴定及表达情况 | 第47-48页 |
| ·RT-PCR方法检测pEGISI在GCs内转录情况 | 第48-49页 |
| ·转染条件的优化 | 第49页 |
| ·pEGISI转染GCs对其增殖的影响 | 第49页 |
| ·pEGISI转染GCs对其凋亡的影响 | 第49-52页 |
| ·pEGISI转染GCs对其激素分泌的影响 | 第52-53页 |
| ·pEGISI转染GCs与卵母细胞共培养对卵母细胞成熟的影响 | 第53-54页 |
| ·pEGISI转染GCs对胚胎发育的影响 | 第54页 |
| ·讨论 | 第54-57页 |
| ·小结 | 第57-59页 |
| 2 卵泡抑制素基因转染卵母细胞对其成熟及胚胎发育的影响 | 第59-68页 |
| ·前言 | 第59-60页 |
| ·材料与方法 | 第60-62页 |
| ·材料 | 第60页 |
| ·方法 | 第60-62页 |
| ·卵母细胞的获取 | 第60页 |
| ·质粒转染卵母细胞的步骤 | 第60页 |
| ·转染后卵母细胞DNA提取 | 第60-61页 |
| ·转染条件的优化 | 第61页 |
| ·转染率的计算 | 第61-62页 |
| ·卵母细胞的成熟鉴定体外受精体外胚胎培养 | 第62页 |
| ·统计分析 | 第62页 |
| ·试验结果 | 第62-65页 |
| ·pEGISI质粒转染卵母细胞可能性 | 第62-64页 |
| ·PCR扩增卵母细胞总DNA检测转染的可能性 | 第62-63页 |
| ·pEGISI转染卵母细胞后在卵母细胞中表达 | 第63-64页 |
| ·pEGISI质粒转染卵母细胞条件的优化 | 第64页 |
| ·pEGISI质粒转染卵母细胞后对卵母细胞成熟及胚胎发育的影响 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-67页 |
| ·小结 | 第67-68页 |
| 3 卵泡抑制素基因转染卵丘卵母细胞复合体对其成熟及胚胎发育的影响 | 第68-82页 |
| ·前言 | 第68页 |
| ·材料与方法 | 第68-70页 |
| ·材料 | 第68页 |
| ·方法 | 第68-70页 |
| ·卵母细胞的筛选与分级 | 第68-69页 |
| ·质粒转染卵母细胞 | 第69页 |
| ·体外成熟培养 | 第69页 |
| ·卵母细胞扩散程度分析 | 第69页 |
| ·卵母细胞成熟分析 | 第69页 |
| ·TUNEL法检测卵母细胞COC凋亡 | 第69-70页 |
| ·培养液的采集和激素测定 | 第70页 |
| ·统计分析 | 第70页 |
| ·试验结果 | 第70-78页 |
| ·pEGISI转染COCs后的表达情况 | 第70-72页 |
| ·pEGISI转染对COCs扩散的影响 | 第72-73页 |
| ·pEGISI转染对COCs凋亡的影响 | 第73-75页 |
| ·pEGISI转染对COCs成熟的影响 | 第75-76页 |
| ·pEGISI转染对COC激素分泌的影响 | 第76-78页 |
| ·pEGISI转染对COCs雌激素分泌的影响 | 第76页 |
| ·pEGISI转染对COCs孕激素分泌的影响 | 第76-78页 |
| ·pEGISI转染对COCs体外受精和胚胎发育的影响 | 第78页 |
| ·讨论 | 第78-80页 |
| ·小结 | 第80-82页 |
| 总结与创新点 | 第82-83页 |
| 1 总结 | 第82页 |
| 2 创新点 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-98页 |
| 附录 | 第98-104页 |
| 附录1:主要仪器和设备 | 第98-99页 |
| 附录2:主要试剂 | 第99-100页 |
| 附录3:主要培养液及操作液配方 | 第100-103页 |
| 附录4 攻读学位期间已发表或待发表学术论文 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104页 |
