| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 符号说明 | 第14-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-25页 |
| 1 CMTI家族介绍 | 第15页 |
| 2 CMTI的结构以及蛋白酶.抑制剂复合物的研究 | 第15-18页 |
| 3 CMTI的酶学特性 | 第18-20页 |
| ·CMTI的作用机制 | 第18页 |
| ·蛋白酶-抑制剂复合物 | 第18-19页 |
| ·P_1位 | 第19-20页 |
| 4 CMTI的应用 | 第20-21页 |
| 5 TI的分离纯化方法 | 第21-24页 |
| ·根据蛋白质溶解度不同的分离方法 | 第21-22页 |
| ·根据蛋白质分子大小的差别的分离方法 | 第22页 |
| ·根据蛋白质带电性质进行分离 | 第22-23页 |
| ·根据配体特异性的分离方法一亲和色谱法(AFFINITY CHROMATOGRAPHY,AC) | 第23-24页 |
| 6 本课题拟研究的问题 | 第24-25页 |
| 第二章 RCMTI-Ⅰ亲和层析介质的制备 | 第25-38页 |
| 1 材料 | 第25-26页 |
| ·试剂及溶液配制 | 第25-26页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·溶液配制 | 第25-26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26页 |
| 2 方法 | 第26-31页 |
| ·微晶纤维素(MCC)的活化 | 第26-27页 |
| ·微晶纤维素的活化反应 | 第26-27页 |
| ·残留环氧氯丙烷的测定 | 第27页 |
| ·FTIR对活化微晶纤维素的表征 | 第27页 |
| ·环氧基修饰密度的定量分析 | 第27页 |
| ·微晶纤维素活化条件的确定 | 第27-28页 |
| ·环氧氯丙烷用量对纤维素上环氧基含量的影响 | 第28页 |
| ·氢氧化钠浓度对纤维素上环氧基含量的影响 | 第28页 |
| ·反应时间对纤维素上环氧基含量的影响 | 第28页 |
| ·温度对纤维素上环氧基含量的影响 | 第28页 |
| ·微晶纤维素作为亲和吸附载体的制备 | 第28-31页 |
| ·胰蛋白酶活力的测定 | 第28-30页 |
| ·标准曲线的制定 | 第28-29页 |
| ·胰蛋白酶活力的测定 | 第29-30页 |
| ·亲合层析介质的制备 | 第30-31页 |
| ·亲合层析介质的制备 | 第30页 |
| ·亲合层析介质交联率的测定 | 第30-31页 |
| ·制备微晶纤维素亲和层析介质最佳胰蛋白酶用量的确定 | 第31页 |
| 3 结果 | 第31-36页 |
| ·微晶纤维素活化条件的确定 | 第31-34页 |
| ·环氧氯丙烷用量对纤维素上环氧基含量的影响 | 第31-32页 |
| ·氢氧化钠浓度对纤维素上环氧基含量的影响 | 第32-33页 |
| ·反应时间对纤维素上环氧基含量的影响 | 第33页 |
| ·温度对纤维素上环氧基含量的影响 | 第33-34页 |
| ·环氧氯丙烷环氧基修饰密度的定量分析 | 第34页 |
| ·FTIR对活化微晶纤维素的表征 | 第34-35页 |
| ·微晶纤维素(MCC)作为亲和吸附载体的制备 | 第35-36页 |
| ·胰蛋白酶活力的测定 | 第35页 |
| ·标准曲线 | 第35页 |
| ·胰蛋白酶活力的测定 | 第35页 |
| ·亲和层析介质的交联率 | 第35-36页 |
| ·制备微晶纤维素亲和层析介质最佳胰蛋白酶用量确定 | 第36页 |
| 4 讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 RCMTI-Ⅰ表达及其分离纯化工艺的研究 | 第38-54页 |
| 1 材料 | 第38-40页 |
| ·试剂及溶液配制 | 第38-39页 |
| ·主要试剂 | 第38-39页 |
| ·溶液配制 | 第39页 |
| ·主要仪器设备 | 第39-40页 |
| 2 方法 | 第40-45页 |
| ·RCMTI-Ⅰ的表达 | 第40-42页 |
| ·菌种的纯化和扩增 | 第40-41页 |
| ·YPD培养基 | 第40页 |
| ·固体培养基 | 第40页 |
| ·发酵培养基 | 第40页 |
| ·菌种的纯化 | 第40页 |
| ·种子液的制备 | 第40-41页 |
| ·菌种的扩增 | 第41页 |
| ·RCMTI-Ⅰ的表达 | 第41页 |
| ·RCMTI-Ⅰ表达和上清抑制活力的初步测定 | 第41-42页 |
| ·表达上清动态抑制活性测定 | 第41页 |
| ·TRICINE-SDS-PAGE测RCMTI-Ⅰ的表达 | 第41-42页 |
| ·RCMTI-Ⅰ的分离纯化 | 第42-44页 |
| ·亲和层析介质对目的蛋白的分离纯化 | 第42-43页 |
| ·层析柱的最大上样量 | 第43页 |
| ·亲和洗脱样品的脱盐 | 第43页 |
| ·目的蛋白的鉴定 | 第43-44页 |
| ·RCMTI-Ⅰ静态抑制活性测定 | 第43页 |
| ·目的蛋白的鉴定 | 第43-44页 |
| ·亲和层析样品的纯化 | 第44页 |
| ·纯化样品的静态抑制活性测定 | 第44页 |
| ·纯化样品的TRICINE-SDS-PAGE | 第44页 |
| ·RCMTI-Ⅰ精确分子量的测定 | 第44页 |
| ·其他方法对RCMTI-Ⅰ的分离纯化 | 第44-45页 |
| ·DEAE-纤维素对RCMTI-Ⅰ的分离纯化 | 第44页 |
| ·羧甲基纤维素CM-Ⅱ对RCMTI-Ⅰ的分离纯化 | 第44-45页 |
| 3 实验结果与分析 | 第45-52页 |
| ·RCMTI-Ⅰ表达和上清抑制活力的初步测定 | 第45-46页 |
| ·RCMTI-Ⅰ表达 | 第45页 |
| ·RCMTI-Ⅰ表达上清抑制活力的初步测定 | 第45-46页 |
| ·RCMTI-Ⅰ的分离纯化 | 第46-51页 |
| ·亲和层析柱层析分离 | 第46-47页 |
| ·层析柱最大上样量 | 第47-48页 |
| ·亲和洗脱样品的脱盐 | 第48页 |
| ·SEPHADEX G-10脱盐样品的抑制活力测定 | 第48页 |
| ·亲和层析样品的进一步纯化 | 第48-49页 |
| ·RCMTI-Ⅰ动态抑制活性的测定 | 第49页 |
| ·TRICINE-SDS-PAGE | 第49-50页 |
| ·RCMTI-Ⅰ精确分子量的测定 | 第50-51页 |
| ·DEAE-纤维素对RCMTI-Ⅰ的分离纯化 | 第51页 |
| ·羧甲基纤维素CM Ⅱ对RCMTI-Ⅰ的分离纯化 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 第四章 RCMTI-Ⅰ对肿瘤细胞增殖的影响 | 第54-62页 |
| 1 材料 | 第54-55页 |
| ·试剂 | 第54页 |
| ·细胞株 | 第54页 |
| ·仪器 | 第54页 |
| ·溶液的配制 | 第54-55页 |
| 2 方法 | 第55-57页 |
| ·RCMTI-Ⅰ对SKOV3细胞增殖作用研究 | 第55-56页 |
| ·SKOV3细胞的复苏 | 第55页 |
| ·SKOV3细胞的传代 | 第55页 |
| ·MTT法测SKOV3细胞增殖 | 第55-56页 |
| ·数据处理 | 第56页 |
| ·RCMTI-Ⅰ对SE-2细胞增殖作用研究 | 第56-57页 |
| ·SE-2细胞的复苏 | 第56页 |
| ·SE-2细胞的传代 | 第56页 |
| ·MTT法测SE*2细胞增殖 | 第56-57页 |
| ·数据处理 | 第57页 |
| 3 实验结果与分析 | 第57-61页 |
| ·RCMTI-Ⅰ对人卵巢黏液囊腺瘤细胞SKOV3生长的影响 | 第57页 |
| ·RCMTI-Ⅰ对SE-2细胞生长的影响 | 第57-61页 |
| 4 讨论 | 第61-62页 |
| 第五章 RCMTI对明胶酶的作用 | 第62-69页 |
| 1 试剂与仪器 | 第62-63页 |
| ·仪器 | 第62-63页 |
| ·试剂 | 第63页 |
| ·试剂配制 | 第63页 |
| 2 实验方法与结果 | 第63-64页 |
| ·琥珀酰化明胶的制备 | 第63页 |
| ·明胶酶抑制活性的测定 | 第63-64页 |
| ·明胶酶抑制活性的测定结果 | 第64页 |
| 3 讨论 | 第64-69页 |
| 总结 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第77-78页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第78页 |
