| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 缩略词表 | 第8-9页 |
| 第一部分 前言 | 第9-12页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第12-24页 |
| 1. 材料 | 第12-15页 |
| ·菌种 | 第12页 |
| ·质粒 | 第12页 |
| ·培养基 | 第12页 |
| ·缓冲液 | 第12-13页 |
| ·工具酶 | 第13页 |
| ·抗体 | 第13页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第13-14页 |
| ·仪器设备 | 第14页 |
| ·实验动物 | 第14-15页 |
| 2. 方法 | 第15-24页 |
| ·大肠杆菌质粒的小量提取 | 第15页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第15页 |
| ·DNA的限制性内切酶的双酶切 | 第15-16页 |
| ·DNA片段的连接 | 第16页 |
| ·DNA电泳分离 | 第16页 |
| ·DNA片段的回收和纯化 | 第16页 |
| ·DNA PCR扩增 | 第16-17页 |
| ·蛋白质的诱导表达 | 第17页 |
| ·表达产物的鉴定及表达水平分析 | 第17页 |
| ·蛋白质存在位置的鉴定 | 第17-18页 |
| ·重组蛋白在摇瓶水平表达条件的优化 | 第18-20页 |
| ·包涵体的洗涤 | 第20页 |
| ·蛋白质纯化 | 第20-21页 |
| ·Lowry法测样品中目的蛋白的浓度 | 第21页 |
| ·免疫双扩散法 | 第21页 |
| ·免疫印迹实验 | 第21-22页 |
| ·免疫检测(GM_1-ELISA) | 第22页 |
| ·动物免疫及血清效价和O157:H7保护力的测定 | 第22-24页 |
| 第三部分 表达质粒pET-CTB-mST2的构建 | 第24-32页 |
| 1. 引言 | 第24页 |
| 2. 结果和分析 | 第24-30页 |
| ·表达质粒pET-CTB-mST2的构建 | 第24-27页 |
| ·表达质粒pET-CTB-mST2的鉴定 | 第27-28页 |
| ·重组质粒PITG-Trx1/ctb-st2和PITG-Trx2/ctb-st2的构建 | 第28页 |
| ·重组质粒PITG-Trx1/ctb-st2和PITG-Trx2/ctb-st2的鉴定 | 第28-29页 |
| ·pET-CTB-mST2、PITG-Trx1/ctb-st2和PITG-Trx2/ctb-st2在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达 | 第29-30页 |
| 3. 讨论 | 第30-31页 |
| 4. 本章小结 | 第31-32页 |
| 第四部分 工程菌在摇瓶水平诱导表达条件的优化 | 第32-38页 |
| 1. 引言 | 第32页 |
| 2. 结果和分析 | 第32-36页 |
| ·培养基成分对表达量的影响 | 第32-34页 |
| ·诱导条件的优化 | 第34-36页 |
| 3. 讨论 | 第36-37页 |
| 4. 本章小结 | 第37-38页 |
| 第五部分 CTB-mST2的表达纯化及其性质的研究 | 第38-44页 |
| 1. 引言 | 第38页 |
| 2. 结果与分析 | 第38-43页 |
| ·重组蛋白包涵体的洗涤及变性 | 第38-39页 |
| ·重组蛋白包涵体的复性及纯化 | 第39-40页 |
| ·CTB-mST2融合蛋白生物学活性的鉴定 | 第40-43页 |
| 3. 讨论 | 第43页 |
| 4. 本章小结 | 第43-44页 |
| 第六部分 总结 | 第44-45页 |
| 1. 本研究主要获得的结果 | 第44页 |
| 2. 本论文的创新之处 | 第44页 |
| 3. 需进一步研究的问题 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-48页 |
| 综述: 肠产毒性大肠杆菌的研究进展 | 第48-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 发表学术论文目录 | 第58-59页 |
| 附图 | 第59-61页 |
