| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-21页 |
| ·概述 | 第11-20页 |
| ·分枝杆菌分类及菌株全基因组测序 | 第11-12页 |
| ·分枝杆菌的检测方法 | 第12-14页 |
| ·分枝杆菌分泌蛋白研究进展 | 第14-18页 |
| ·牛结核病概述 | 第18-20页 |
| ·研究目的与意义 | 第20-21页 |
| 第二章 牛分枝杆菌特异性抗原MPB64蛋白原核表达 | 第21-32页 |
| ·材料和试剂 | 第21-24页 |
| ·菌种、载体及宿主 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要溶液和培养基的配制 | 第21-23页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-28页 |
| ·牛分枝杆菌的培养及其基因组DNA的提取 | 第24页 |
| ·目的基因的扩增 | 第24-25页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第25页 |
| ·PCR产物连接pMD18T-Vector及重组质粒的鉴定 | 第25-26页 |
| ·表达载体的构建与鉴定 | 第26页 |
| ·重组质粒pET-mpb64在大肠杆菌中的诱导表达 | 第26页 |
| ·融合蛋白的小量纯化 | 第26-27页 |
| ·纯化蛋白的浓度测定 | 第27页 |
| ·纯化蛋白的Western blot分析 | 第27-28页 |
| ·结果 | 第28-30页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第28页 |
| ·重组质粒T-mpb64的鉴定 | 第28页 |
| ·重组质粒pET-mpb64的鉴定 | 第28页 |
| ·目的片段的序列分析 | 第28-29页 |
| ·诱导表达融合蛋白及其纯化 | 第29页 |
| ·纯化蛋白的Western blot分析 | 第29-30页 |
| ·纯化蛋白的浓度测定 | 第30页 |
| ·讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 MPB64蛋白单克隆抗体的制备 | 第32-43页 |
| ·细胞、实验动物及材料 | 第32页 |
| ·细胞、实验动物 | 第32页 |
| ·试剂配制 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-38页 |
| ·抗原的制备 | 第32-34页 |
| ·真核载体瞬时表达 | 第34-35页 |
| ·动物免疫 | 第35页 |
| ·细胞融合 | 第35-36页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第36页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的亚克隆 | 第36页 |
| ·单克隆抗体的大量制备 | 第36页 |
| ·ELISA检测 | 第36-37页 |
| ·Western blotting分析 | 第37页 |
| ·单克隆抗体的生物学鉴定 | 第37-38页 |
| ·结果 | 第38-41页 |
| ·瞬时转染 | 第38页 |
| ·动物免疫抗体水平检测 | 第38-39页 |
| ·细胞融合 | 第39页 |
| ·单克隆抗体亚类鉴定 | 第39页 |
| ·Western blot鉴定 | 第39页 |
| ·腹水与重组蛋白rMPB64反应 | 第39-40页 |
| ·单克隆抗体识别抗原表位的鉴定 | 第40页 |
| ·ELISA鉴定 | 第40-41页 |
| ·细胞稳定性 | 第41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 第四章 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-48页 |
| 附录:基因扩增产物与标准序列比对 | 第48-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 作者简介 | 第51页 |
