| 中文摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-27页 |
| ·昆虫病原真菌的侵染寄主致病的研究进展 | 第13-18页 |
| ·昆虫病原真菌的致病机理 | 第14-15页 |
| ·在致病过程中发挥作用的水解酶类 | 第15-17页 |
| ·水解酶类的相互作用 | 第17-18页 |
| ·昆虫几丁质酶的研究进展 | 第18-23页 |
| ·已克隆的昆虫几丁质酶基因种类 | 第18-19页 |
| ·昆虫几丁质酶的特性及生理作用 | 第19-20页 |
| ·昆虫几丁质酶的结构特点及表达分析 | 第20-23页 |
| ·昆虫几丁质酶在植物保护和基因工程中的应用 | 第23页 |
| ·几丁质结合域(ChBD) | 第23-25页 |
| ·ChBD的特征 | 第24页 |
| ·ChBD的作用 | 第24-25页 |
| ·球孢白僵菌的形态特征 | 第25-27页 |
| 第二章 引言 | 第27-29页 |
| ·研究的背景和意义 | 第27-28页 |
| ·技术路线 | 第28-29页 |
| 第三章 材料与方法 | 第29-39页 |
| ·材料 | 第29-31页 |
| ·菌株及主要载体 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29页 |
| ·主要仪器设备 | 第29页 |
| ·主要培养基 | 第29-30页 |
| ·主要缓冲液配方 | 第30-31页 |
| ·方法 | 第31-39页 |
| ·家蚕几丁质酶Bmchi和BmchiΔc序列的获得 | 第31-32页 |
| ·Bmchi和BmchiΔc毕赤酵母表达载体的构建 | 第32页 |
| ·酵母表达载体的线性化及去磷酸化处理 | 第32页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞的制备及转化 | 第32-33页 |
| ·酵母转化子的G418筛选 | 第33页 |
| ·酵母转化子的PCR验证 | 第33-34页 |
| ·重组酵母的表达分析 | 第34页 |
| ·Bmchi和BmchiΔc的纯化 | 第34页 |
| ·GlcNAc和4-MU标准曲线的制定 | 第34页 |
| ·几丁质酶活性测定方法 | 第34-35页 |
| ·几丁质酶与几丁质的结合分析 | 第35页 |
| ·几丁质酶的最适反应pH和最适反应温度分析 | 第35页 |
| ·几丁质酶的热稳定性分析 | 第35-36页 |
| ·几丁质酶对胶体几丁质的降解测定 | 第36页 |
| ·球孢白僵菌表达载体的构建 | 第36页 |
| ·球孢白僵菌的遗传转化 | 第36页 |
| ·球孢白僵菌转化子几丁质酶活性测定 | 第36-37页 |
| ·转化子的PCR验证 | 第37页 |
| ·CTAB法提取真菌总RNA | 第37页 |
| ·Northern blot | 第37-38页 |
| ·生物测定 | 第38-39页 |
| 第四章 结果与分析 | 第39-55页 |
| ·几丁质酶Bmchi和BmchiΔc在毕赤酵母中的表达 | 第39-50页 |
| ·Bmchi和BmchiΔc酵母表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·重组质粒转化毕赤酵母及筛选 | 第40-41页 |
| ·酵母转化子的PCR验证 | 第41页 |
| ·Bmchi和BmchiΔc的诱导表达 | 第41-42页 |
| ·Bmchi和BmchiΔc的纯化及SDS-PAGE检测 | 第42-43页 |
| ·几丁质酶的酶学特性分析 | 第43-48页 |
| ·家蚕几丁质酶对胶体几丁质的降解作用 | 第48-49页 |
| ·几丁质寡糖的降解产物分析 | 第49-50页 |
| ·组成性表达家蚕几丁质酶基因对球孢白僵菌毒力的影响 | 第50-55页 |
| ·真菌表达载体的构建与遗传转化 | 第50页 |
| ·球孢白僵菌转化子的筛选 | 第50-52页 |
| ·超量表达Bmchi提高了球孢白僵菌毒力 | 第52-55页 |
| 第五章 讨论 | 第55-57页 |
| ·几丁质酶在毕赤酵母中的表达 | 第55页 |
| ·家蚕几丁质酶的酶学特性分析 | 第55-56页 |
| ·家蚕几丁质酶对球孢白僵菌毒力的影响 | 第56-57页 |
| 第六章 小结 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 附录1: 文中缩写 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-66页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第66页 |
