| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-16页 |
| 前言 | 第16-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-43页 |
| 1 嗅觉感器及触角感受机制 | 第18-20页 |
| 2 昆虫信息素结合蛋白的研究进展 | 第20-28页 |
| ·昆虫信息素结合蛋白的分子特征 | 第21-24页 |
| ·信息素结合蛋白在触角中的分布 | 第24页 |
| ·昆虫信息素结合蛋白与信息素分子的结合与释放机制 | 第24-26页 |
| ·昆虫信息素结合蛋白的生理功能 | 第26-27页 |
| ·昆虫信息素结合蛋白的进化基因组学 | 第27-28页 |
| 3 嗅觉受体的研究进展 | 第28-43页 |
| ·脊椎动物嗅觉受体的发现 | 第29页 |
| ·嗅觉受体蛋白的结构 | 第29-31页 |
| ·无脊椎动物嗅觉受体 | 第31-43页 |
| ·线虫嗅觉受体基因鉴定 | 第31页 |
| ·昆虫嗅觉受体基因 | 第31-37页 |
| ·特殊的Or83b及类似受体蛋白 | 第37-40页 |
| ·化—电信号转换 | 第40-43页 |
| 第二章 甜菜夜蛾2个信息素结合蛋白基因的克隆和相对表达水平研究 | 第43-64页 |
| 1 材料与方法 | 第44-52页 |
| ·供试昆虫 | 第44页 |
| ·主要试剂和仪器设备 | 第44-45页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·主要仪器设备 | 第44-45页 |
| ·昆虫核酸提取 | 第45-46页 |
| ·总RNA的提取 | 第45页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第45-46页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第46页 |
| ·PCR引物设计 | 第46-48页 |
| ·PCR扩增 | 第48页 |
| ·RACE扩增PBP基因的cDNA | 第48页 |
| ·PCR产物纯化、克隆、测序和序列分析 | 第48-51页 |
| ·PCR产物纯化 | 第48-49页 |
| ·连接反应 | 第49页 |
| ·转化反应 | 第49-50页 |
| ·小量质粒DNA的提取 | 第50-51页 |
| ·序列测定 | 第51页 |
| ·序列分析 | 第51页 |
| ·甜菜夜蛾PBP基因的定量分析 | 第51-52页 |
| ·引物设计 | 第51页 |
| ·实时荧光定量PCR反应 | 第51页 |
| ·实时荧光定量PCR反应效率的确定 | 第51页 |
| ·甜菜夜蛾PBP基因mRNA表达量比较 | 第51-52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-62页 |
| ·甜菜夜蛾PBP基因cDNA片段的克隆与分析 | 第52-54页 |
| ·甜菜夜蛾PBP基因全长cDNA的克隆与分析 | 第54-59页 |
| ·甜菜夜蛾PBP基因的组织特异性表达 | 第59页 |
| ·PCR产物熔解曲线及荧光定量PCR扩增效率一致性分析 | 第59-62页 |
| ·甜菜夜蛾PBP基因相对表达量的比较 | 第62页 |
| 3 讨论 | 第62-64页 |
| 第三章 斜纹夜蛾2个信息素结合蛋白基因的克隆、序列分析及相对表达水平研究 | 第64-87页 |
| 1 材料与方法 | 第65-70页 |
| ·供试材料 | 第65页 |
| ·主要试剂 | 第65页 |
| ·昆虫核酸提取 | 第65-66页 |
| ·总RNA的提取 | 第65-66页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第66页 |
| ·PCR引物设计 | 第66-68页 |
| ·PCR扩增 | 第68页 |
| ·RACE技术扩增PBP基因的cDNA全序列 | 第68页 |
| ·PCR产物纯化、克隆和测序 | 第68-69页 |
| ·PCR产物纯化 | 第68-69页 |
| ·连接反应和转化反应 | 第69页 |
| ·序列分析 | 第69页 |
| ·斜纹夜蛾PBP基因的定量分析 | 第69-70页 |
| ·引物设计 | 第69页 |
| ·实时荧光定量PCR反应 | 第69-70页 |
| ·实时荧光定量PCR反应效率的确定 | 第70页 |
| ·斜纹夜蛾PBP基因mRNA表达量比较 | 第70页 |
| ·Western杂交分析 | 第70页 |
| 2 结果与分析 | 第70-85页 |
| ·斜纹夜蛾PBP基因cDNA片段的克隆与分析 | 第70-72页 |
| ·斜纹夜蛾PBP基因全长cDNA的克隆与分析 | 第72-76页 |
| ·斜纹夜蛾PBP同源性比较及系统发育分析 | 第76-80页 |
| ·斜纹夜蛾PBP基因的组织特异性表达 | 第80页 |
| ·PCR产物熔解曲线及荧光定量PCR扩增效率一致性分析 | 第80-83页 |
| ·斜纹夜蛾PBP基因相对表达量的比较 | 第83-84页 |
| ·Western杂交结果 | 第84-85页 |
| 3 讨论 | 第85-87页 |
| 第四章 甜菜夜蛾信息素结合蛋白基因的原核表达及重组蛋白的纯化 | 第87-104页 |
| 1 材料、试剂和仪器设备 | 第87-89页 |
| ·供试昆虫 | 第87-88页 |
| ·质粒和菌株 | 第88页 |
| ·主要化学试剂 | 第88页 |
| ·主要仪器设备 | 第88-89页 |
| 2 实验方法 | 第89-96页 |
| ·引物设计及PCR产物鉴定 | 第89页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第89-90页 |
| ·重组质粒pGEM-PBP和表达载体pET 30a(+)的双酶切反应 | 第89-90页 |
| ·目的片段和表达载体片段的连接 | 第90页 |
| ·连接产物的转化和鉴定 | 第90页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第90页 |
| ·表达产物的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测 | 第90-91页 |
| ·信息素结合蛋白基因的表达和纯化 | 第91-93页 |
| ·融合蛋白的酶解 | 第93页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第93-94页 |
| ·抗体制备 | 第94-95页 |
| ·免疫原的制备 | 第94页 |
| ·免疫程序 | 第94页 |
| ·ELISA检测免疫动物的抗体水平 | 第94-95页 |
| ·Western杂交分析 | 第95-96页 |
| ·样品制备及SDS-PAGE电泳 | 第95页 |
| ·蛋白质从凝胶转移至PVDF膜 | 第95-96页 |
| ·杂交与检测 | 第96页 |
| 3 结果 | 第96-102页 |
| ·表达质粒的构建和鉴定 | 第96-97页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中表达及可溶性分析 | 第97-99页 |
| ·重组蛋白的纯化及肠激酶酶解 | 第99-100页 |
| ·ELISA检测免疫动物的抗体水平 | 第100-101页 |
| ·Western杂交结果 | 第101-102页 |
| 4 讨论 | 第102-104页 |
| 第五章 甜菜夜蛾和斜纹夜蛾嗅觉受体基因的克隆及序列分析 | 第104-117页 |
| 1 材料与方法 | 第105-107页 |
| ·供试材料 | 第105页 |
| ·主要试剂 | 第105页 |
| ·总RNA的提取及cDNA第一链的合成 | 第105页 |
| ·PCR引物设计 | 第105-106页 |
| ·PCR扩增 | 第106-107页 |
| ·RACE扩增PBP基因的cDNA全序列 | 第107页 |
| ·PCR产物纯化、克隆、测序和序列分析 | 第107页 |
| ·PCR产物纯化、克隆和测序 | 第107页 |
| ·序列分析 | 第107页 |
| 2 结果与分析 | 第107-115页 |
| ·甜菜夜蛾和斜纹夜蛾嗅觉受体基因的克隆与分析 | 第107-111页 |
| ·嗅觉受体同源性比较及系统发育分析 | 第111-115页 |
| 3 讨论 | 第115-117页 |
| 全文总结 | 第117-118页 |
| 参考文献 | 第118-135页 |
| 附录:攻读博士学位期间学术论文的发表情况 | 第135-136页 |
| 致谢 | 第136页 |
