| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 引言 | 第10-23页 |
| ·聚酮化合物与聚酮合酶 | 第10-13页 |
| ·聚酮化合物 | 第10页 |
| ·聚酮合酶 | 第10-13页 |
| ·真菌聚酮合酶 | 第13-16页 |
| ·真菌聚酮合酶的结构 | 第13-14页 |
| ·真菌聚酮合酶的特性 | 第14-15页 |
| ·真菌聚酮合酶的分类 | 第15-16页 |
| ·真菌聚酮合酶基因克隆技术的发展 | 第16-19页 |
| ·免疫筛选法和遗传互补法 | 第16页 |
| ·同源探针法 | 第16-18页 |
| ·其它方法 | 第18页 |
| ·后基因组时代给发掘聚酮合酶基因带来新的契机 | 第18-19页 |
| ·聚酮合酶研究之展望 | 第19-20页 |
| ·聚酮合酶的组合生物合成 | 第20-22页 |
| ·组合生物合成简介 | 第20页 |
| ·聚酮合酶组合生物合成的研究进展 | 第20-22页 |
| ·主要研究内容、目的和意义 | 第22-23页 |
| 第2章 橙色红曲菌聚酮合酶基因片段的克隆 | 第23-43页 |
| ·材料 | 第23-26页 |
| ·菌种和质粒 | 第23页 |
| ·主要仪器与设备 | 第23-24页 |
| ·试剂与溶液 | 第24-26页 |
| ·方法 | 第26-33页 |
| ·实验技术路线 | 第26页 |
| ·简并引物设计与合成 | 第26-27页 |
| ·氯化苄法提取橙色红曲菌AS3.4384基因组DNA | 第27-28页 |
| ·简并PCR | 第28-29页 |
| ·TA克隆 | 第29-31页 |
| ·克隆子鉴定与测序 | 第31-33页 |
| ·实验结果 | 第33-42页 |
| ·红曲菌基因组DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·简并PCR | 第34页 |
| ·TA克隆 | 第34-36页 |
| ·克隆子鉴定 | 第36-38页 |
| ·序列测定及分析 | 第38-40页 |
| ·pks2序列分析 | 第40页 |
| ·4个Contig序列的保守性 | 第40-42页 |
| ·小结 | 第42-43页 |
| 第3章 橙色红曲菌聚酮合酶基因的筛选及亚克隆 | 第43-67页 |
| ·材料 | 第43-45页 |
| ·菌种和质粒 | 第43页 |
| ·试剂与溶液 | 第43-45页 |
| ·方法 | 第45-53页 |
| ·实验技术路线 | 第45页 |
| ·引物设计与合成 | 第45-46页 |
| ·Fosmid黏粒的提取 | 第46-48页 |
| ·PCR筛选Fosmid文库 | 第48-49页 |
| ·亚克隆文库的构建 | 第49-52页 |
| ·亚克隆文库的插入片段大小验证 | 第52页 |
| ·阳性克隆的筛选和鉴定 | 第52-53页 |
| ·结果 | 第53-66页 |
| ·Fosmid文库筛选 | 第53-54页 |
| ·亚克隆文库的构建 | 第54-56页 |
| ·亚克隆文库的插入片段大小验证 | 第56-58页 |
| ·阳性克隆子的筛选 | 第58-60页 |
| ·序列测序 | 第60页 |
| ·PKS序列的生物信息学分析 | 第60-63页 |
| ·系统发育分析 | 第63-66页 |
| ·小结 | 第66-67页 |
| 第4章 讨论 | 第67-70页 |
| ·简并PCR | 第67页 |
| ·TA克隆子特异性的鉴定 | 第67-68页 |
| ·超声波破碎阳性黏粒 | 第68-70页 |
| 第5章 结论与展望 | 第70-71页 |
| ·结论 | 第70页 |
| ·进一步工作方向 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 附录A 4条PKS基因片段的比对结果 | 第78-80页 |
| 附录B MApks1序列的比对结果 | 第80-82页 |
| 附录C MApks3序列的比对结果 | 第82-84页 |
| 附录D MApks10序列的比对结果 | 第84-86页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第86页 |