| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 第一章 综述 | 第14-27页 |
| ·前言 | 第14页 |
| ·乳酸菌EPS的功能 | 第14-16页 |
| ·增强黏膜吸附作用 | 第15页 |
| ·抗肿瘤作用 | 第15页 |
| ·促进机体免疫作用 | 第15-16页 |
| ·乳酸菌EPS的应用 | 第16-18页 |
| ·EPS在食品中的应用 | 第16-17页 |
| ·EPS其他方面 | 第17-18页 |
| ·产EPS乳酸菌及合成途径 | 第18-21页 |
| ·糖转输入胞质 | 第18页 |
| ·合成糖-1-磷酸 | 第18-19页 |
| ·糖核苷酸合成及EPS重复单位的聚合 | 第19-20页 |
| ·EPS的合成及输出 | 第20-21页 |
| ·影响乳酸菌EPS合成的因素 | 第21-23页 |
| ·乳酸菌种类 | 第21-22页 |
| ·营养基质 | 第22页 |
| ·温度 | 第22页 |
| ·pH值 | 第22-23页 |
| ·其它影响因素 | 第23页 |
| ·提高乳酸菌EPS产量的方法 | 第23-27页 |
| ·传统方法 | 第23页 |
| ·基因工程 | 第23-24页 |
| ·代谢工程 | 第24-27页 |
| 第二章 产胞外多糖乳酸菌的筛选 | 第27-36页 |
| ·引言 | 第27页 |
| ·实验材料 | 第27-28页 |
| ·材料 | 第27-28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-31页 |
| ·乳酸菌的活化 | 第28-29页 |
| ·乳酸菌的分离 | 第29页 |
| ·黏度测定 | 第29-30页 |
| ·EPS的提取 | 第30页 |
| ·发酵液中蛋白的去除 | 第30页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第30-31页 |
| ·EPS含量测定 | 第31页 |
| ·菌种保藏 | 第31页 |
| ·结果与讨论 | 第31-35页 |
| ·乳酸菌的分离 | 第31-32页 |
| ·黏度测定 | 第32-33页 |
| ·Folin-酚法测定蛋白质标准曲线 | 第33页 |
| ·多糖除蛋白方法比较结果 | 第33-34页 |
| ·多糖测定方法的确定 | 第34-35页 |
| ·EPS的含量测定 | 第35页 |
| ·小结 | 第35-36页 |
| 第三章 大肠杆菌UGPase基因的克隆及序列分析 | 第36-51页 |
| ·引言 | 第36页 |
| ·实验材料 | 第36-38页 |
| ·菌株、质粒 | 第36页 |
| ·主要生化试剂 | 第36-37页 |
| ·引物设计 | 第37页 |
| ·实验仪器 | 第37-38页 |
| ·常规培养基及溶液的配制 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-43页 |
| ·菌株培养 | 第38-39页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第39页 |
| ·碱裂解法质粒提取 | 第39页 |
| ·紫外分光光度法测定目的基因与载体的浓度 | 第39页 |
| ·琼脂糖电泳鉴定DNA | 第39-40页 |
| ·PCR扩增 | 第40页 |
| ·PCR产物的割胶回收或从溶液中回收纯化 | 第40页 |
| ·目的基因的T/A克隆、筛选和测序 | 第40-43页 |
| ·结果与讨论 | 第43-50页 |
| ·E.coli BL21的基因组提取 | 第43-44页 |
| ·galU基因的PCR | 第44页 |
| ·克隆重组质粒pMD18-T-galU的构建 | 第44-45页 |
| ·克隆质粒的鉴定 | 第45-47页 |
| ·测序及同源性分析 | 第47-50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| 第四章 大肠杆菌galU基因在乳酸乳球菌中的克隆表达 | 第51-65页 |
| ·引言 | 第51页 |
| ·实验材料 | 第51-53页 |
| ·菌株、质粒 | 第51页 |
| ·主要生化试剂 | 第51-52页 |
| ·引物 | 第52页 |
| ·实验设备 | 第52页 |
| ·常规培养基及溶液的配制 | 第52-53页 |
| ·方法 | 第53-58页 |
| ·菌株培养 | 第53页 |
| ·高纯度质粒中量提取方法 | 第53页 |
| ·紫外分光光度法测定目的基因与载体的浓度 | 第53页 |
| ·琼脂糖电泳鉴定DNA | 第53-54页 |
| ·回收酶切后的大片段 | 第54页 |
| ·限制性酶切 | 第54-55页 |
| ·目的基因与载体的连接 | 第55页 |
| ·感受态细胞的制作 | 第55-56页 |
| ·乳酸菌的电穿孔转化和筛选 | 第56页 |
| ·重组载体pNZ8048-galU的鉴定 | 第56-57页 |
| ·UGPase的诱导表达 | 第57-58页 |
| ·结果与讨论 | 第58-64页 |
| ·表达载体的构建 | 第58-60页 |
| ·表达质粒的鉴定 | 第60-64页 |
| ·小结 | 第64-65页 |
| 第五章 UGPase基因插入对宿主菌产EPS的影响 | 第65-72页 |
| ·引言 | 第65页 |
| ·实验材料 | 第65-66页 |
| ·材料 | 第65-66页 |
| ·主要仪器 | 第66页 |
| ·实验方法 | 第66页 |
| ·培养方法 | 第66页 |
| ·pH值测定 | 第66页 |
| ·菌体量测定 | 第66页 |
| ·EPS的提取 | 第66页 |
| ·EPS的含量测定 | 第66页 |
| ·结果与讨论 | 第66-71页 |
| ·不同碳源对EPS合成的影响 | 第66-68页 |
| ·培养基初始pH对EPS合成的影响 | 第68-69页 |
| ·发酵温度对EPS合成的影响 | 第69页 |
| ·培养时间对乳酸菌的生长和EPS合成的影响 | 第69-71页 |
| ·小结 | 第71-72页 |
| 第六章 结论与建议 | 第72-74页 |
| ·结论 | 第72-73页 |
| ·建议 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 简历及发表的论文 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 附录 | 第82-83页 |