| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 英文缩略词 | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-24页 |
| ·植酸酶及其分类 | 第13-14页 |
| ·植酸酶的酶学特性 | 第14-15页 |
| ·植酸酶的结构 | 第15-16页 |
| ·植酸酶的基因工程研究进展 | 第16-20页 |
| ·植酸酶的研究展望 | 第20-21页 |
| ·酵母表达系统 | 第21-23页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 2 实验材料与方法 | 第24-49页 |
| ·实验材料 | 第24页 |
| ·主要试剂的配制 | 第24-30页 |
| ·培养基的配制 | 第24-27页 |
| ·实验相关溶液的配制 | 第27-30页 |
| ·实验方法 | 第30-49页 |
| ·产胞外植酸酶菌株的筛选 | 第30页 |
| ·A. niger N-J 植酸酶phyA 基因的扩增、克隆及序列测定 | 第30-36页 |
| ·A. niger N-J 植酸酶phyA 基因酵母分泌型表达载体的构建 | 第36-38页 |
| ·pPICZαA/phyA 电击转化毕赤酵母及酵母转化子的筛选 | 第38-41页 |
| ·A. niger N-J 植酸酶phyA 基因在毕赤酵母中的诱导表达 | 第41页 |
| ·植酸酶生物学性质的测定 | 第41-46页 |
| ·植酸酶的酶学性质的测定 | 第46-49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-66页 |
| ·A. niger N-J 植酸酶phyA 基因的扩增、克隆及序列测定 | 第49-52页 |
| ·A. niger N-J 基因组DNA 的提取 | 第49页 |
| ·A. niger N-J 植酸酶phyA 基因的PCR 扩增 | 第49-50页 |
| ·植酸酶phyA 基因扩增产物的克隆及序列分析 | 第50-52页 |
| ·植酸酶phyA 基因分泌型酵母表达载体的构建和鉴定 | 第52-54页 |
| ·pPICZαA/phyA 电击转化毕赤酵母及酵母转化子的筛选 | 第54-56页 |
| ·pPICZαA/phyA 电击转化毕赤酵母 | 第54-55页 |
| ·酵母转化子的PCR 鉴定 | 第55-56页 |
| ·植酸酶phyA 基因在毕赤酵母中的高效表达及表达产物的检测 | 第56-57页 |
| ·植酸酶phyA 基因在毕赤酵母中的高效表达产酶曲线的测定 | 第56页 |
| ·植酸酶phyA 基因表达产物的SDS-PAGE 检测 | 第56-57页 |
| ·表达植酸酶的酶学性质研究 | 第57-66页 |
| ·表达植酸酶动力学参数的测定 | 第57-59页 |
| ·表达植酸酶最适pH 值 | 第59-60页 |
| ·表达植酸酶最适反应温度 | 第60-61页 |
| ·表达植酸酶的热稳定性测定 | 第61-63页 |
| ·热变性后植酸酶的荧光发射光谱的测定 | 第63-66页 |
| 4 讨论 | 第66-70页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第66-67页 |
| ·实现外源蛋白在毕赤酵母表达系统中高效表达的策略 | 第67-68页 |
| ·表达植酸酶的酶学性质 | 第68页 |
| ·表达植酸酶的热稳定性分析 | 第68-69页 |
| ·尚待进一步研究的问题 | 第69-70页 |
| 5 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第81页 |
