| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一部分 文献综述 | 第10-24页 |
| 1.抗菌肽的研究进展 | 第10-18页 |
| ·抗菌肽的发现 | 第10-11页 |
| ·抗菌肽的分类及理化性质 | 第11-13页 |
| ·抗菌肽的功能研究 | 第13-15页 |
| ·抗菌肽的直接抗菌活性 | 第13-14页 |
| ·抗菌肽的免疫调节活性 | 第14-15页 |
| ·抗菌肽的应用前景 | 第15-17页 |
| ·Cecropin类抗菌肽 | 第17-18页 |
| 2.人源溶菌酶的研究进展 | 第18-19页 |
| ·人源溶菌酶的理化性质 | 第18页 |
| ·人源溶菌酶的药理作用及应用前景 | 第18-19页 |
| 3.抗菌肽基因工程研究进展 | 第19-21页 |
| ·抗菌肽基因工程研究中的问题及解决方案 | 第19-20页 |
| ·抗菌肽克隆基因的表达 | 第20页 |
| ·人工合成抗菌肽基因和融合肽基因的表达 | 第20-21页 |
| 4.实验的意义和研究内容 | 第21-24页 |
| 第二部分 材料和方法 | 第24-37页 |
| 1.主要试剂与仪器 | 第24-26页 |
| ·基本试剂及生产厂家 | 第24页 |
| ·本实验所用的菌株 | 第24-25页 |
| ·主要仪器和厂家 | 第25页 |
| ·试剂和培养基 | 第25-26页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·抗生素 | 第26页 |
| 2.实验方法 | 第26-37页 |
| ·基本方法 | 第26页 |
| ·菌种的活化 | 第26页 |
| ·菌体的培养 | 第26页 |
| ·菌液的收集 | 第26页 |
| ·细胞破碎 | 第26页 |
| ·融合蛋白CB—hLy在大肠杆菌E.coil中的诱导表达 | 第26-28页 |
| ·在37℃下,BL21(DE3)和BL21(DE3)pLysS的诱导表达 | 第26-27页 |
| ·在LB培养基中的诱导表达 | 第27页 |
| ·在TB培养基中的诱导表达 | 第27页 |
| ·在25℃诱导温度下,BL21(DE3)和BL21(DE3)pLysS的诱导表达 | 第27页 |
| ·在LB培养基中的诱导表达 | 第27页 |
| ·在TB培养基中的诱导表达 | 第27页 |
| ·诱导前更换培养基对融合蛋白CB—hLy表达量的影响 | 第27-28页 |
| ·在LB培养基中诱导表达 | 第27-28页 |
| ·在TB培养基中诱导表达 | 第28页 |
| ·重组菌株的诱导时机的分析 | 第28页 |
| ·诱导时间对融合蛋白CB—hLy表达量的影响 | 第28页 |
| ·融合蛋白Cecropin B-hLysozyme在重组菌株中的表达分析 | 第28页 |
| ·融合蛋白Cecropin B-hLysozyme的纯化 | 第28-30页 |
| ·亲和柱层析IDA-Ni | 第28-30页 |
| ·凝胶排阻脱盐柱层析G-75 | 第30页 |
| ·变性聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶电泳 | 第30-32页 |
| ·蛋白的处理 | 第31页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳的制备 | 第31-32页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳的条件 | 第32页 |
| ·蛋白浓度分析 | 第32-34页 |
| ·融合蛋白Cecropin B-hLysozyme生物活性检测 | 第34-37页 |
| ·抗菌肽等抗菌、抑菌物质的生物活性检测方法概述 | 第34-35页 |
| ·用琼脂渗透法测定融合蛋白Cecropin B-hLysozyme生物活性 | 第35-37页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第37-49页 |
| 1.融合蛋白CB—hLy在大肠杆菌E.coil中的诱导表达 | 第37-43页 |
| ·在37℃下,BL21(DE3)和BL21(DE3)pLysS的诱导表达 | 第37-38页 |
| ·在LB培养基中的诱导表达 | 第37页 |
| ·在TB培养基中的诱导表达 | 第37-38页 |
| ·在25℃诱导温度下,BL21(DE3)和BL21(DE3)pLysS的诱导表达 | 第38-40页 |
| ·在LB培养基中的诱导表达 | 第38页 |
| ·在TB培养基中的诱导表达 | 第38-40页 |
| ·诱导前更换培养基对融合蛋白CB—hLy表达量的影响 | 第40-42页 |
| ·在LB培养基中的诱导表达 | 第40页 |
| ·在TB培养基中的诱导表达 | 第40-42页 |
| ·重组菌株pET32a-CB-hLy/BL21(DE3)pLysS诱导时机的分析 | 第42-43页 |
| ·诱导时间对融合蛋白CB—hLy表达量的影响 | 第43页 |
| ·融合蛋白Cecropin B-hLysozyme在重组菌株中的表达分析 | 第43页 |
| 2 融合蛋白Cecropin B-hLysozyme的纯化 | 第43-46页 |
| ·Ni2+螯合的Chelating Sepharose F.F.亲合柱色谱 | 第43-45页 |
| ·Sephadex G-75凝胶排阻柱色谱 | 第45-46页 |
| 3 融合蛋白CB—hLy浓度的分析 | 第46-48页 |
| 4 融合蛋白CB—hLy的活性检测 | 第48-49页 |
| 第四部分 结论 | 第49-51页 |
| 1 结论 | 第49页 |
| 2 存在的主要问题 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
