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木霉菌产生厚垣孢子相关基因的筛选与克隆

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-10页
英文缩略表第10-11页
第一章 绪论第11-26页
   ·木霉菌研究进展第11-15页
     ·木霉菌在生防中的作用第11-12页
     ·木霉菌分子生物学研究进展第12-15页
   ·研究厚垣孢子萌发相关基因的方法第15-18页
     ·mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)第15-16页
     ·抑制性消减杂交(SSH)第16-17页
     ·cDNA代表性差异分析第17页
     ·基因表达系列分析技术(serial analysis of gene expression,SAGE)第17-18页
     ·转座子标签技术第18页
     ·cDNA扩增片段长度多态性技术(cDNA-AFLP)第18页
   ·cDNA-AFLP技术简介第18-21页
     ·cDNA-AFLP技术的基本原理和方法第19页
     ·cDNA-AFLP技术的特点第19-20页
     ·cDNA-AFLP技术的应用及发展前景第20-21页
   ·生物信息学的应用第21-24页
     ·生物信息学数据库第22-23页
     ·生物信息学在基因研究中的应用第23-24页
   ·研究目的和意义第24-26页
第二章 利用CDNA-AFLP技术分析产生厚垣孢子相关基因第26-36页
   ·实验材料第26页
   ·实验方法第26-36页
     ·总RNA的提取和cDNA的制备第27-28页
     ·cDNA-AFLP分析第28-30页
     ·聚丙烯酸胺凝胶中差异片段的回收第30页
     ·二次PCR扩增第30-31页
     ·PCR产物的纯化第31页
     ·反向Northern杂交第31-32页
     ·Northern杂交第32-34页
     ·特异片段的连接、转化第34-35页
     ·阳性克隆的鉴定菌液PCR检测第35页
     ·序列测定第35-36页
第三章 结果与分析第36-43页
   ·木霉菌丝的培养第36页
   ·木霉菌丝总RNA的提取第36-37页
   ·双链cDNA的合成第37页
   ·cDNA酶切片段的预扩增第37页
   ·选择性扩增第37-39页
   ·差异条带回收第39页
   ·二次 PCR扩增第39页
   ·反向NORTHERN杂交第39-40页
   ·差异片段的克隆第40页
   ·重组质粒的PCR鉴定第40-41页
   ·差异片段的序列分析与比较第41-42页
   ·NORTHERN杂交第42-43页
第四章 讨论第43-46页
   ·木霉菌菌丝总 RNA的提取方法第43页
   ·木霉菌cDNA-AFLP技术中预扩增及选择性扩增条件的筛选第43页
   ·二次扩增结果第43-44页
   ·REVERSE NORTHERN杂交第44页
   ·木霉菌厚垣孢子生成相关特异cDNA片段序列分析第44-45页
   ·展望第45-46页
第五章 全文结论第46-47页
参考文献第47-53页
致谢第53-54页
作者简历第54-55页
附录: 主要试剂配方第55-58页

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