| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-31页 |
| 1 概述 | 第10-11页 |
| 2 IBDV的病原学特性 | 第11-12页 |
| ·病毒学分类与结构特性 | 第11页 |
| ·理化特性 | 第11-12页 |
| ·生物学特性 | 第12页 |
| 3 IBDV的致病机理 | 第12-14页 |
| 4 分子生物学研究进展 | 第14-21页 |
| ·IBDV基因组结构 | 第14-15页 |
| ·病毒蛋白及其功能 | 第15-19页 |
| ·病毒抗原变异的分子基础 | 第19页 |
| ·IBDV毒力变异的分子基础 | 第19-21页 |
| 5 IBD的诊断 | 第21-23页 |
| ·流行病学 | 第21页 |
| ·临床症状 | 第21页 |
| ·病理变化 | 第21页 |
| ·IBD诊断方法的研究进展 | 第21-23页 |
| 6 IBD的防制 | 第23-30页 |
| ·常规疫苗免疫 | 第24-25页 |
| ·新型传染性法氏囊病疫苗研究进展 | 第25-29页 |
| ·免疫防制中存在的问题及对策 | 第29-30页 |
| 7 结束语 | 第30-31页 |
| 第二章 传染性法氏囊病毒VP2基因的克隆与表达 | 第31-54页 |
| 1 研究目的与意义 | 第31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-43页 |
| ·材料 | 第31-36页 |
| ·病毒、质粒、细菌及抗体 | 第31页 |
| ·工具酶及主要生物学试剂 | 第31-33页 |
| ·主要试剂及溶液的配制 | 第33-36页 |
| ·实验方法 | 第36-43页 |
| ·引物的设计与合成 | 第36页 |
| ·病毒的增殖、收获及纯化 | 第36页 |
| ·病毒RNA提取 | 第36-37页 |
| ·RT-PCR扩增及检测 | 第37页 |
| ·DNA片段的回收 | 第37页 |
| ·回收的目的DNA片段与克隆载体pMD18-T的连接反应 | 第37-38页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第38页 |
| ·连接产物的转化 | 第38页 |
| ·质粒的制备 | 第38-39页 |
| ·重组质粒的鉴定与序列分析 | 第39-40页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第40-41页 |
| ·诱导表达 | 第41页 |
| ·表达产物的鉴定 | 第41-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-49页 |
| ·VP2基因的RT-PCR扩增结果 | 第43页 |
| ·克隆质粒的酶切鉴定 | 第43页 |
| ·序列测定分析及系统发育进化树 | 第43-47页 |
| ·表达载体的构建与鉴定 | 第47页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE和Western blot结果 | 第47-49页 |
| ·重组菌菌体裂解物的SDS-PAGE电泳结果 | 第47-48页 |
| ·Western blot分析 | 第48-49页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第49页 |
| 4 讨论与结论 | 第49-54页 |
| ·IBDV dsRNA的提取与VP2基因的扩增 | 第49-50页 |
| ·IBDV VP2基因的克隆 | 第50页 |
| ·VP2基因原核表达载体的构建 | 第50-51页 |
| ·VP2蛋白的表达、提取与纯化 | 第51页 |
| ·包涵体的提取及溶解复性 | 第51-53页 |
| ·小结 | 第53-54页 |
| 第三章 ELISA方法的建立与临床应用 | 第54-64页 |
| 1 研究目的与意义 | 第54-55页 |
| 2 材料与方法 | 第55-58页 |
| ·材料 | 第55页 |
| ·标准血清和酶标抗体 | 第55页 |
| ·ELISA试剂的配制 | 第55页 |
| ·主要实验器材 | 第55页 |
| ·方法 | 第55-58页 |
| ·IBD-ELISA最佳工作条件的确定 | 第55-57页 |
| ·间接ELISA测定的基本实验步骤 | 第57页 |
| ·间接ELISA方法阴阳性临界值的确定 | 第57页 |
| ·重复性试验 | 第57页 |
| ·特异性试验 | 第57-58页 |
| ·临床血清样品的检测 | 第58页 |
| 3 结果与分析 | 第58-62页 |
| ·ELISA最佳条件及阴阳性界限的确定 | 第58-61页 |
| ·反应板均一性测定 | 第58页 |
| ·最佳包被浓度及血清最佳稀释倍数的确定 | 第58-59页 |
| ·酶标抗体工作浓度的确定 | 第59页 |
| ·封闭液的选择及封闭时间的确定 | 第59-60页 |
| ·阴阳性血清反应时间的确定 | 第60页 |
| ·酶标二抗的作用时间的确定 | 第60-61页 |
| ·底物反应时间的确定 | 第61页 |
| ·间接ELISA方法阴阳性临界值的确定 | 第61页 |
| ·重复性试验 | 第61页 |
| ·特异性试验 | 第61-62页 |
| ·临床送检血清的ELISA检测结果 | 第62页 |
| 4 讨论与结论 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 致谢 | 第72页 |