| 符号说明 | 第1-14页 |
| 中文摘要 | 第14-16页 |
| ABSTRACT | 第16-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-53页 |
| 1 烟草中特有的亚硝胺 | 第19-25页 |
| ·亚硝胺的毒性 | 第19页 |
| ·TSNA 的类型，合成前体及形成途径 | 第19-20页 |
| ·影响烟草TSNA 积累的主要因素 | 第20-23页 |
| ·烟草遗传类型与TSNA | 第20页 |
| ·烟草组织与TSNA | 第20页 |
| ·栽培技术与烟草TSNA | 第20-21页 |
| ·烟叶采收调制与贮存陈化 | 第21页 |
| ·微生物与TSNA | 第21-22页 |
| ·抗生素 | 第22-23页 |
| ·降解烟草特有亚硝胺 | 第23-25页 |
| 2 硝酸还原与反硝化作用 | 第25-32页 |
| ·同化型硝酸盐还原 | 第25-28页 |
| ·植物NR | 第25-26页 |
| ·植物NR 的调节 | 第26-27页 |
| ·Nicotiana spp NR 缺失 | 第27页 |
| ·细菌NR | 第27-28页 |
| ·真菌NR | 第28页 |
| ·异化型硝酸还原 | 第28-32页 |
| ·细菌异化型NR | 第29页 |
| ·真菌异化型NR | 第29-32页 |
| 3 硝酸还原酶结构、功能和调节 | 第32-49页 |
| ·结构特性 | 第33-41页 |
| ·多肽序列 | 第33-36页 |
| ·协作因子和金属离子 | 第36-37页 |
| ·功能片断和区域 | 第37-40页 |
| ·硝酸还原酶全酶的3-D 结构模型 | 第40-41页 |
| ·功能特征 | 第41-46页 |
| ·硝酸还原酶的催化反应及功能片段 | 第41-43页 |
| ·功能性氨基酸残基 | 第43-44页 |
| ·残基决定的吡啶核苷酸特异性 | 第44-46页 |
| ·调节 | 第46-49页 |
| ·调节的分子机制 | 第46-48页 |
| ·NR 的磷酸化和被14-3-3 蛋白的抑制 | 第48-49页 |
| 4 实际应用 | 第49-51页 |
| ·硝酸盐污染问题 | 第49-50页 |
| ·硝酸还原酶作为环境生物技术工具 | 第50-51页 |
| 5 发展展望 | 第51-52页 |
| 6 本研究的目的意义 | 第52-53页 |
| 第二章 反硝化细菌的筛选及培养条件的研究 | 第53-62页 |
| 1 材料与方法 | 第53-56页 |
| ·材料 | 第53-54页 |
| ·菌株及来源 | 第53-54页 |
| ·培养基及制备 | 第54页 |
| ·仪器与器材 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-56页 |
| ·菌株反硝化作用能力的测定 | 第54-55页 |
| ·菌株适宜培养基及好气性测定 | 第55-56页 |
| ·生长温度的测定 | 第56页 |
| ·菌体浓度的测定 | 第56页 |
| 2 结果与分析 | 第56-60页 |
| ·菌株反硝化作用强度的筛选 | 第56-58页 |
| ·产气测定 | 第56-57页 |
| ·菌株降解硝酸盐特性测定 | 第57-58页 |
| ·培养基及好气性测定 | 第58-59页 |
| ·生长温度测定 | 第59页 |
| ·生长浓度的测定 | 第59-60页 |
| 3 结论与讨论 | 第60-62页 |
| 第三章 烟草特有亚硝胺的生物降解 | 第62-68页 |
| 1 材料与方法 | 第62-64页 |
| ·材料 | 第62-63页 |
| ·菌种及来源 | 第63页 |
| ·培养基 | 第63页 |
| ·仪器与器材 | 第63页 |
| ·烟丝 | 第63页 |
| ·方法 | 第63-64页 |
| ·菌株的培养 | 第63页 |
| ·菌悬液降解TSNA 的测定 | 第63-64页 |
| 2 结果与分析 | 第64-66页 |
| ·菌悬液作用好气性及作用时间测定 | 第64-65页 |
| ·菌悬液对烟丝质量的影响 | 第65-66页 |
| 3 讨论 | 第66-68页 |
| 第四章 反硝化细菌菌株888、8237 的鉴定 | 第68-87页 |
| 1 材料与方法 | 第69-75页 |
| ·实验材料 | 第69-70页 |
| ·供试菌株 | 第69页 |
| ·培养基 | 第69页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第69页 |
| ·试剂配制 | 第69-70页 |
| ·实验方法 | 第70-75页 |
| ·DNA 的提取 | 第70-71页 |
| ·16 SrDNA 片断PCR 扩增 | 第71页 |
| ·PCR 产物回收 | 第71-72页 |
| ·连接 | 第72页 |
| ·转化 | 第72-73页 |
| ·菌落PCR 鉴定 | 第73页 |
| ·质粒提取 | 第73-74页 |
| ·酶切鉴定 | 第74-75页 |
| ·16S rDNA 序列测定 | 第75页 |
| ·系统发育树的构建 | 第75页 |
| 2 结果与分析 | 第75-85页 |
| ·16S rDNA 片断PCR 扩增 | 第75-77页 |
| ·16S rDNA 的序列 | 第77-79页 |
| ·基于16 SrDNA 序列的分析 | 第79-83页 |
| ·同源性分析 | 第83-85页 |
| 3 讨论 | 第85-87页 |
| 第五章 芽孢杆菌硝酸还原酶的纯化及特性 | 第87-108页 |
| 1. 材料与方法 | 第88-93页 |
| ·实验材料 | 第88-89页 |
| ·供试菌株 | 第88页 |
| ·培养基 | 第88页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第88-89页 |
| ·实验方法 | 第89-93页 |
| ·液体发酵培养 | 第89页 |
| ·诱导底物浓度对硝酸还原酶产生的影响 | 第89页 |
| ·不同培养时间对硝酸还原酶产生的影响 | 第89页 |
| ·酶活力测定 | 第89-90页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第90页 |
| ·Bacillus subtilis B88 硝酸还原酶的分离纯化 | 第90-91页 |
| ·蛋白质分子量测定和纯度鉴定 | 第91-92页 |
| ·活性电泳 | 第92页 |
| ·硝酸还原酶酶学特性的研究 | 第92-93页 |
| 2 结果与分析 | 第93-103页 |
| ·诱导底物浓度对硝酸还原酶产生的影响 | 第93-94页 |
| ·不同培养时间对硝酸还原酶产生的影响 | 第94-95页 |
| ·硝酸还原酶的分离纯化 | 第95-100页 |
| ·DEAE-Sepharose 阴离子交换柱层析 | 第95页 |
| ·Phenyl-Sepharose 疏水柱层析 | 第95-96页 |
| ·Sephadex G-200 凝胶过滤层析 | 第96-97页 |
| ·硝酸还原酶纯化过程总表 | 第97-98页 |
| ·硝酸还原酶分子量和纯度鉴定 | 第98-100页 |
| ·硝酸还原酶的特性研究 | 第100-103页 |
| ·最适反应温度 | 第100页 |
| ·最适反应pH 值 | 第100-101页 |
| ·硝酸还原酶的热稳定性 | 第101-102页 |
| ·硝酸还原酶的pH 稳定性 | 第102-103页 |
| ·不同金属离子对硝酸还原酶活性的影响 | 第103页 |
| 3 讨论 | 第103-108页 |
| ·Bacillus subtilis B88 硝酸还原酶的纯化方法 | 第103-105页 |
| ·Bacillus subtilis B88 硝酸还原酶的特性 | 第105-106页 |
| ·Bacillus subtilis B88 硝酸还原酶的应用和存在的问题 | 第106-108页 |
| 第六章 芽孢杆菌硝酸还原酶编码基因的克隆及其序列分析 | 第108-133页 |
| 1 材料和方法 | 第108-113页 |
| ·材料 | 第108-110页 |
| ·供试菌株 | 第108页 |
| ·菌株与质粒 | 第108-109页 |
| ·酶和生化试剂 | 第109页 |
| ·仪器 | 第109页 |
| ·培养基 | 第109页 |
| ·PCR 引物设计 | 第109-110页 |
| ·实验方法 | 第110-113页 |
| ·DNA 的提取 | 第110页 |
| ·各亚基PCR 扩增 | 第110-112页 |
| ·PCR 产物回收 | 第112页 |
| ·连接 | 第112页 |
| ·转化 | 第112页 |
| ·菌落PCR 鉴定 | 第112页 |
| ·质粒提取 | 第112页 |
| ·酶切鉴定 | 第112-113页 |
| ·序列测定 | 第113页 |
| ·序列分析 | 第113页 |
| 2 结果与分析 | 第113-131页 |
| ·亚基PCR 扩增 | 第113-117页 |
| ·α亚基PCR 扩增 | 第113-114页 |
| ·β亚基PCR 扩增 | 第114-115页 |
| ·γ亚基PCR 扩增 | 第115-116页 |
| ·δ亚基PCR 扩增 | 第116-117页 |
| ·硝酸还原酶基因的核苷酸序列和氨基酸序列 | 第117-123页 |
| ·α亚基核苷酸序列及推测的相应氨基酸序列 | 第117-120页 |
| ·β亚基核苷酸序列及推测的相应氨基酸序列 | 第120-122页 |
| ·γ亚基核苷酸序列及推测的相应氨基酸序列 | 第122页 |
| ·δ亚基核苷酸序列及推测的相应氨基酸序列 | 第122-123页 |
| ·硝酸还原酶基因氨基酸序列分析 | 第123-130页 |
| ·α亚基氨基酸序列分析 | 第123-125页 |
| ·β亚基氨基酸序列分析 | 第125-128页 |
| ·γ亚基氨基酸序列分析 | 第128-129页 |
| ·δ亚基氨基酸序列分析 | 第129-130页 |
| ·硝酸还原酶基因的信号肽分析 | 第130-131页 |
| 3 讨论 | 第131-133页 |
| 第七章 结论和建议 | 第133-135页 |
| 1. 结论 | 第133-134页 |
| 2. 建议 | 第134-135页 |
| 参考文献 | 第135-157页 |
| 致谢 | 第157-159页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第159页 |
