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表达γ-亚麻酸的无标记转基因大豆的培育

1 前言第1-35页
   ·γ-亚麻酸的研究进展第9-14页
     ·多不饱和脂肪酸的生物合成途径第9-10页
     ·γ-亚麻酸的发现历史第10-11页
     ·γ-亚麻酸及其代谢产物的生理功能第11-12页
     ·γ-亚麻酸的生物资源第12-14页
   ·Δ~6-脂肪酸脱氢酶的研究进展第14-18页
     ·脂肪酸脱氢酶第14-15页
     ·Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因(Δ~6-fatty acid desaturase,D6D)的研究第15-17页
     ·基因工程研究第17-18页
   ·大豆研究进展第18-26页
     ·大豆转基因的受体系统第18-20页
     ·大豆遗传转化方法第20-24页
     ·转基因大豆生产及其生物安全性评价第24-26页
   ·标记基因的安全性问题第26-32页
     ·选用安全的标记基因第27-28页
     ·无选择标记的转基因技术第28-32页
   ·本研究的目的和意义第32-34页
   ·表达γ-亚麻酸的无标记基因转基因大豆的培育第34-35页
2 材料与方法第35-52页
   ·材料第35页
     ·植物材料第35页
     ·菌种及质粒第35页
     ·主要化学试剂第35页
   ·方法第35-52页
     ·Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因的克隆与测序第35-41页
     ·植物表达载体的构建第41-42页
     ·大豆的遗传转化及转基因植株的分析第42-52页
3 结果与分析第52-81页
   ·Δ~6—脂肪酸脱氢酶基因克隆及其共转化表达载体的构建第52-56页
     ·RT—PCR扩增第52页
     ·目的片段的克隆第52-53页
     ·目的片段的序列测定与分析第53页
     ·表达载体pLIN61构建第53-55页
     ·表达载体pLIN61的PCR鉴定和酶切鉴定第55-56页
   ·大豆的遗传转化和转基因植株的分析第56-81页
     ·三亲交配PCR检测与酶切鉴定第56-57页
     ·不同大豆品种子叶节丛生芽诱导率的比较第57-58页
     ·大豆子叶节不定芽分化和伸长的除草剂Glufosinate梯度实验第58-60页
     ·大豆转化抗性再生植株的获得及转化频率第60-61页
     ·大豆转化抗性再生植株除草剂Glufosinate抗性检测第61页
     ·大豆转化抗性再生植株的PCR检测第61-63页
     ·大豆转化抗性再生植株的Southern杂交证实第63-65页
     ·转基因大豆目的基因D6D的表达第65页
     ·T_1代转基因植株的PCR扩增第65-68页
     ·T_1代转基因植株的Southern杂交检测第68-71页
     ·T_1转基因植株除草剂抗性鉴定第71-73页
     ·T_2代转基因植株的除草剂抗性鉴定和PCR扩增第73-75页
     ·T_2代转基因植株的Southern blot检测第75-77页
     ·无标记基因T_2代种子的Northern杂交检测第77-78页
     ·转基因大豆脂肪酸的气相色谱(GC)分析第78-81页
4 讨论第81-85页
   ·无标记转基因植株的获得第81-82页
   ·Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因的表达第82-83页
   ·转基因植株后代的分离第83页
   ·转基因植物中的基因沉默现象第83-85页
5 结论第85-86页
参考文献第86-93页
缩写词及其英汉对照第93-94页
附录第94-100页
 Ⅰ 大豆组织培养培养基配方:第94-98页
 Ⅱ 彩版第98-99页
 Ⅲ 作者简历第99-100页
致谢第100页

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